實驗室“標配”擬南芥研磨提取核酸引發的討論

給大家分享的內容是——擬南芥研磨提取核酸。

那接下來，就讓我們先睹為快，看看這個案例的情況。

實驗：擬南芥研磨提取核酸

實驗地點：某大學

實驗樣品：擬南芥

實驗儀器：TL2020高通量組織研磨儀

實驗步驟：

1、在2ml圓底離心管底放入擬南芥樣品，每管樣品量不超過單管體積的1/3；

2、在離心管中加入3mm硬質不銹鋼研磨珠2顆；

3、接下來的步驟根據提取目的不同操作略有不同，以表格形式展現如下：

此外，以下我們邀請了提供此案例的嘉賓老師和一些用戶朋友進行了分享和討論。

嘉賓：大家好，之前跟大家分享過幾期多是動物組織，這次我們分享一次植物組織的案例。植物組織的特點是一般樣品量比較大，老師們多會采用2ml的離心管，每次用適配器的話就是2mlx2X56的研磨量，基本都可以滿足實驗的需求了。

嘉賓：之所以想跟大家分享這次的案例，是因為這位老師采用的組織研磨儀研磨方式比較系統全面一些，用組織研磨儀濕磨和冷凍研磨都有。濕磨他通常是在提取DNA的時候使用，冷凍研磨多用于提取RNA，不知道群里各位老師是否也是采用類似的研磨方式。

嘉賓：在這個案例中，我們看到樣品是擬南芥，像其他的葉片類組織，比如黃瓜、苜蓿、水稻等，都可以采用同樣的設置進行研磨。

用戶：DNA和rna的提取條件有什么區別？

嘉賓：RNA的話我們知道比較會容易降解，所以會需要浸泡液氮，以及將用具進行滅菌，而且盡可能在保證快速短時間的研磨條件下進行。

用戶：做過生菜。

嘉賓：您可以跟我們分享下您提生菜葉片的條件嗎？是提取RNA還是DNA呢？

用戶：液氮手工磨，DNA。上學時，全是手工配，累死。

嘉賓：還好生菜應該是屬于容易研磨的類型吧。

用戶：玻璃研磨器都沒法用，只能陶瓷的，玻璃直接炸。

嘉賓：您可以用一用我們的組織研磨儀。

用戶：現在不做了。

嘉賓：提DNA的話用自動組織研磨儀就可以濕磨，也方便后期離心，不用擔心轉移帶來的污染了。不做了就解放雙手了。

嘉賓：一般來說，如果是較有任性的植物組織，比如水稻莖等，對樣品的進入量大小要求會略嚴格。

用戶：抽提液離心管還不能用滅菌的。

用戶：禾本科的植物相對難磨。

嘉賓：如果能盡量將樣品本身剪成1cm長左右的小段會對研磨有大幫助。

用戶：恩，所以用液氮。

嘉賓：是的，您是不是做過類似的植物樣本？

用戶：對，我們實驗室只做植物樣品。

嘉賓：如果是研磨剛說的韌性含纖維的植物樣本，除了剛老師說的用液氮，也可以同時采用1大1小的鋼珠來研磨。

嘉賓：那您這邊經驗應該比較豐富的，您一般做的都有哪些樣品呢？

用戶：我們這一般的植物樣品都有，豆類，玉米，油菜牧草類。

嘉賓：樣品種類確實很多啊。

用戶：我們是植物實驗室。

嘉賓：一般來說，您覺得哪種比較難磨呢？

用戶：我們好多樣品是直接研磨種子，豆類、油菜、苜蓿種子不好磨。

用戶：組織研磨儀研磨珠用的什么材質的？

用戶：我們的組織研磨儀用的是萊馳的mm400，用的是大的不銹鋼珠。

嘉賓：用的是不銹鋼的，3mm的鋼珠。

用戶：擬南芥是什么東東？

嘉賓：實驗用的擬南芥看著還挺可愛的，長在培養皿里，小小的一整片。

用戶：植物研究的模式植物。

用戶：我還以為是藥材呢。

嘉賓：種子的話，用組織研磨儀您一般會間歇多次研磨嗎？還是說一次性研磨幾分鐘？

用戶：玉米及其他相對容易磨的，一次性一分鐘基本沒問題，豆類和苜蓿種子一般兩三次，但一定先要液氮處理過。

嘉賓：是的，種子和我之前說的水稻莖這種一定要液氮過才能出研磨效果。

用戶：這就是擬南芥。

用戶供圖

嘉賓：謝謝史老師，擬南芥植物中的果蠅。對于難研磨的樣品，我們有時也會采用之前說的大鋼珠配小鋼珠的研磨方法，大鋼珠可以把大塊打成小塊，小鋼珠再通過不停的撞擊把樣品研細。

用戶：屬于標準物質，具有代表性或者把復雜物質簡單化。樣品的提取效率怎么樣？

嘉賓：樣品的提取效率是有保證的，之前也有過案例分享是和手研磨的進行比對，效果是比較突出的，一般老師提取之后會跑一個電泳，看膠圖的效果，之后在進行具體的檢測和下一步工作。上次分享的案例是做藥物代謝分析的，結果也是讓老師滿意的。

嘉賓：樣品的自動研磨效果確實對后續提取核酸、蛋白，酶，以及其他成分分析類實驗是很有幫助的

用戶：嗯，非常好。