寨卡病毒實驗室檢測技術方案

寨卡病毒(Zika Virus)屬黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬（Flavivirus），呈球形，直徑約為40-70nm，有包膜。基因組為單股正鏈RNA，長度約為10.8Kb，可分為亞洲型和非洲型兩個基因型。

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。

1檢測對象

（一）疑似和臨床診斷病例。

（二）伊蚊成蚊和幼蟲。

2樣本采集、保存和運輸

（一）病例標本采集。

對懷疑感染寨卡病毒的患者，推薦采集血清標本開展檢測。

用無菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5mL，及時分離血清，分裝2管，保存于帶螺旋蓋、內有墊圈的凍存管內，標記清楚后低溫保存，其中1管用于現場實驗室檢測，1管用于上級疾病預防控制機構復核。

對病例應盡可能采集雙份血液標本，兩份標本之間相隔14天為宜，住院病例可于入院當天和出院前1天各采集一份。

（二）蚊媒標本采集。

疫點內采集的伊蚊成蚊及幼蟲，分類鑒定后，填寫媒介標本采集信息表，按照采集地點分裝，每管10-20只。

（三）標本保存、運送。

如標本能夠在24小時內開展實驗室檢測，應將標本置于2-8℃保存；如能在7天內開展檢測，應將樣本置于-20℃保存；如需保存7天以上，應將樣本置于-70℃以下。

標本運送時采用低溫冷藏運輸，避免凍融，樣本運輸應遵守國家關于三類病原體的相關生物安全規定。

3檢測方法

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。

開展蚊媒寨卡病毒檢測時，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。

開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。

（一）臨床標本檢測

1．病原學檢測

病原學檢測主要適用于急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。

（1）核酸檢測：采用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。

（2）病毒分離：將標本接種于蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以后，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。

2．血清學檢測

（1）血清特異性IgM抗體：發病3天后可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天后檢出率高。可采用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易于產生假陽性。

（2）中和抗體：采用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。

（二）媒介標本檢測

1．標本處理

將分類后的伊蚊成蚊或幼蟲，按照采集地點，每10～20只為一份進行研磨處理。

2．病毒核酸檢測

用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測

3．病毒分離

病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。

4生物安全

寨卡病毒在我國歸屬于三類病原體，應在生物安全二級實驗室（BSL-2）開展實驗室檢測。應按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》等相關規定要求，做好生物安全防護工作。