1．制瓊脂板 以pH8.6離子強度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm。
2．打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對的小孔數列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm。挑去孔內瓊脂，封底。
3．加樣 一對孔中，一孔加已知（或待測）抗原，另一孔加待測（或已知）抗體。
4．電泳 將抗原孔置于負極端。電壓2.5V/cm～6V/cm，或電流強度3mA/cm～5mA/cm，電泳時間30min～90min。
