小鼠胚胎成骨細胞前體細胞（含STR）mc3t3e1細胞怎么養？

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞（MC3T3-E1）怎么養

細胞中文名稱：小鼠胚胎成骨細胞前體細胞

細胞形態：成纖維細胞樣

細胞特性：貼壁

培養條件：DMEM+10% FBS

規格：T25/ml

溫度：37°C

空氣條件：5% CO2，95% AIR

培養步驟：

1、吸走用于培養基，加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；

2、吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面，培養瓶放 37 度培養箱消化；（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞完全漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3、加入 6-8ml 完全培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4、將混勻的細胞 1000rpm（約 150g）離心 3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸 37 度培養箱繼續培養；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用
1:3-1:4 傳代，生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。

凍存：
1、凍存液：92%完全培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）

2、降溫步驟：4 度 10min，-20 度 2h，-80 過夜后液氮保存。

運輸及售后問題：
1、細胞經過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞Si亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞  可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約 150g)離心 3min，棄上清。加5mlPBS 重懸細胞，再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min，用新鮮的完全培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略 PBS 重懸的步驟；如果碎片很多，建議 PBS 多洗幾次。

2、細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。

3、細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（Gao不超過 20%），也可以根據細胞生長狀態， 選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。