MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞
| Catalogue No. | C1047 |
| Product Format | a T25 flask |
| Culture Properties | 貼壁 |
| Complete Growth Medium | 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗 |
| Atmosphere | air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5% |
| Application | Cells and cancer research |
| NOTE | FOR RESEARCH USE ONLY。 |
Components
| Item | Specifications |
| a T25 flask | 2X106 |
| Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture
1、吸走用于培養基，加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；
2、吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰酶浸沒細胞表面，培養瓶放 37 度培養箱消化；（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞完全漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3、加入 6-8ml 完全培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
4、將混勻的細胞 1000rpm（約 150g）離心 3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸 37 度培養箱繼續培養；
傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用
1:3-1:4 傳代，生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。
Cell cryopreservation
1、凍存液：92%完全培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）
2、降溫步驟：4 度 10min，-20 度 2h，-80 過夜后液氮保存。
Tips：
1、細胞經過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約 150g)離心 3min，棄上清。加5mlPBS 重懸細胞，再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min，用新鮮的完全培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略 PBS 重懸的步驟；如果碎片很多，建議 PBS 多洗幾次。
2、細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
3、細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（最高不超過 20%），也可以根據細胞生長狀態， 選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
4、不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min 均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞完全漂浮。客戶消化過度導致細胞死亡、漂浮、生長緩慢， 不提供免費售后服務。
5、干冰發貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯系我方并在我方指導下復蘇第二支。若客戶同時復蘇兩支均狀態不佳， 我方不提供免費售后服務。
6、細胞狀態正常時，應盡快凍存細胞保種，凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細胞導致死亡負責， 客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務。