1.取小鼠股骨脛骨，小鼠要年輕！(6W-8W，以前用只年把的養出來外形也張牙舞爪，但流式檢測沒有CD11c表達，很奇怪啊；性別方面公母不限，經典版本說公的好，公的壯實，骨頭大)
2.沖骨髓細胞，我沖出來的骨髓細胞永遠沒有文獻上說的那樣多，但不影響大局，我一次用兩只，怕出意外少了細胞，論壇里有戰友說不要混一起，我不知道具體原因，盼賜教
3. 細胞計數，不去紅細胞！(不知是好是壞，文獻說去紅細胞會把一些祖細胞也去掉了)記數，計數只記白細胞(形態學區分，紅細胞無核較小，目前我的眼睛目前還在為此積累經驗)，2×10e6(似乎太低，這套方案作者是架起式一皿養到第12天的，所以我個人覺得看你在哪天收細胞做下游實驗，如果只養到第6天或者第8天，多點應該也行吧？)白細胞種100mm細菌培養皿(注意是細菌培養皿，說懸浮細胞還是用細菌皿好，還說抑制細胞貼壁，讓更多祖細胞向樹突細胞分化而不是巨噬細胞)，這一天記為第0天
4.第3天加等體積(10ml)BMDC培養基
配方：每50ml含：1640基礎培養基45ml， 5ml滅活胎牛血清，50ul 100×的beta巰基乙醇(一直不知道它的作用，請高手跳出來作答謝謝啊)，500ul 100×的谷氨酸鹽(谷氨酰胺？我現在用Gibco的Glutamax，說不會降解產生氨)，1ug rmGM-CSF(Chemicon和PPT的都用過，現在用PPT，還行好像)
5.第6天，第8天半量換液，離心設置為300g，5min(不知道夠不夠，肯定有損失)
6.第10天300g，5min收集懸浮細胞轉到細胞培養皿(巨噬細胞多貼點壁)，同時培養基成分里rmGM-CSF含量至少減半(好像說怕繼續分化成非樹突吧，文獻看了有一段時間記得不那么清楚了慚愧啊，其實文獻僅供參考，也不一定對，關鍵還是自己的實踐)
7.第11天加LPS刺激其成熟，普遍認為(也可能是我自己認為)，第6天或第8天收不成熟DC會比較多，看實驗需要，建議想要不成熟DC的朋友請在這兩天收網)