使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)，再與 HRP標記的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗體 ，形成抗體-抗原-酶標抗。用純化的小鼠體復合物，經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)濃度。
標本要求：
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過（HRP）活性。
操作步驟：
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
4.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。