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  • 發布時間:2022-09-19 12:44 原文鏈接: 尿激酶的效價測定

    1 酶活力

    (1)試劑 牛纖維蛋白原溶液取牛纖維蛋白原,加巴比妥一氯化鈉緩沖液(pH 7.8)制成每1ml中含6.67mg可凝結蛋白的溶液。

    牛凝血酶溶液 取牛凝血酶,加巴比妥一氯化鈉緩沖液(pH 7.8)制成每1ml中含6.0單位的溶液。

    牛纖維蛋白溶酶原溶液 取牛纖維蛋白溶酶原,加三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH 9.0)制成每1ml中含1~1.4酪蛋白單位的溶液(如溶液渾濁,離心,取上清液備用)。

    混合溶液 臨用前取等體積的牛凝血酶溶液和牛纖維蛋白溶酶原溶液,混勻。

    (2)標準品溶液的制備 取尿激酶標準品,加巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)溶解并定量稀釋制成每1ml中含60單位的溶液。

    (3)供試品溶液的制備 取本品適量,加巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)溶解,混勻,并定量稀釋成與標準品溶液相同的濃度。

    (4)測定法 取試管4支,各加牛纖維蛋白原溶液0.3ml,置37℃±0.5℃水浴中,分別加入巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml,依次加標準品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml,再分別加混合溶液0.4ml,立即搖勻,分別計時。反應系統應在30~40秒內凝結,當凝塊內小氣泡上升到反應系統體積一半時作為反應終點,立即記時。每種濃度測3次,求平均值(3次測定中最大值與最小值的差不得超過平均值的10%)。以尿激酶濃度的對數為橫坐標,以反應終點時間的對數為縱坐標,進行線性回歸。供試品按上法測定,用線性回歸方程求得效價,計算每1mg中供試品的效價(單位)。

    2 蛋白質含量

    取本品約10mg,精密稱定,照蛋白質含量測定法(2010年版藥典二部附錄Ⅶ M第一法)測定,即得。

    3 比活

    每1mg蛋白中含尿激酶活力單位數。


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