層析技術及離心技術

（一)層析技術

層析法是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術。可分為吸附層析法、分配層析法、離子交換層析法、凝膠層析法、親和層析法、高效液相層析法等。

在層析法中，根據層析峰的位置及峰高或峰面積，可以定性及定量。層析法與光學、電學或電化學儀器連用，可檢測出層析后各組分的濃度或質量，同時繪出層析圖。

層析儀與電子計算機聯用，可使操作及數據處理自動化，大大縮短分析時間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度高、選擇性好、速度快等特點，因此適用于雜質多、含量少的復雜樣品分析，尤其適用于生物樣品的分離分析。

紙層析是以濾紙作為支持介質，為液-液層析。由于固定相和流動相的極性不同，當流動相展開時，各組分按各自的分配系數不同而得到分離。

薄層層析是利用涂布在載體上的吸附劑等作為固定相，用適當的溶劑進行展開，其優點是：設備簡單，操作容易，分離效率高，可用腐蝕性的顯色劑并在高溫下顯色。

凝膠層析是以凝膠作為固定相，水或各類溶劑作為流動相，其機理是當被分離物質流經凝膠柱時，因各組分的分子大小不同在凝膠受到的阻滯作用有差異，從而造成各組分在凝膠中的遷移速度不同而得到分離。凝膠的網孔大小與交聯度有關，交聯度越大，網孔的孔徑越小。被篩分的分子量越小。凝膠層析的主要操作步驟包括：凝膠柱的制備與平衡、加樣、洗脫、標本檢測等。

親和層析是利用配體和生物大分子之間專一性親和力的層析分離方法。具有專一性親和力的生物分子主要有：抗原與抗體，酶與底物，激素與受體等。

離子交換層析是利用離子交換劑對各種離子親和力的不同來分離混合物的層析技術。離子交換劑的種類有：離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換葡聚糖等。如按原理可分：陰離子交換劑、陽離子交換劑。

(二)離心技術

離心技術是根據顆粒在作勻速圓周運動時受到一個外向的離心力的行為而發展起來的一種分離技術。這項技術在臨床生化中常用來分離化學反應后的沉淀物和收集生物大分子物質。

離心機依據離心機轉頭的旋轉速度，可分為低速離心(4 000r／min以內)、高速離心(20 000r／min)和超速離心(30 000r／min以上)三種類型。離心機的主要結構包括轉子、驅動軸和電機。其中轉子可以有幾種形式：固定角式轉子、水平轉子、區帶轉子、連續離心轉子等等。

離心技術根據離心原理和工作的需要，大致可分為：①平衡離心法，包括差速離心法和速率區帶離心法；②等密度離心法；③經典式沉降平衡離心法三類。

使用離心機時用注意轉子的保養、離心管老化與否、裝樣量、操作規程、即期的定期保養。