[cDNA末端磷酸化]
1.70℃滅活反應后，稍微離心一下，置室溫5分鐘。
2.在反應混合物（10μl）中加入：
1μl10×連接緩沖液
2μl10mMATP
1μl（10μ）DNA激酶
[限制性內切酶消化]以得到粘性末端
1.限制性內切酶消化DNA和載體。
2.在37℃保溫1~5小時，然后冷卻到室溫，如果選用定向插入，需用兩個不同的限制性內切酶消化，可得到兩個不同的粘性末端。
[cDNA大小的選擇]
1. 在50μl的總體積中加入5μl0×STE緩沖液。
2.SephacrylS-400柱收集分離出的cDNA。
3.用酚，氯仿抽提。
4.酒精沉淀之后，懸浮cDNA在10μl的無菌水中。
[cDNA和載體連接]載體可用λgt10,λgt11或λZAPⅡ
cDNA(0.1~1μg)2.5μl
10×連接緩沖液0.5μl
10mMαATP0.5μl
載體（1μg/μl）1.0μl
T4DNA連接酶（4WeissU/μl）0.5μl
總體積為5μl
12℃保溫過夜，或4℃兩天，然后放在室溫下2小時。
[包裝]試劑由Strategene制備
1.包裝提取物從-70℃取出立即放入干冰中。
2.同時化解超聲提取物（黃色）。令在手指間溶解凍紅色管，到剛剛開始化時，加1μlDNA置于冰上。
3.快速加15μl超聲提取物到DNA中，仔細混合，避免氣泡，在室溫下保溫2小時（22℃）。
4.加500μl噬斑稀釋緩沖液（SM溶液），再加20μl氯仿，溫和的混合。
5.離心棄去噬菌體碎片。這個cDNA文庫可以測效價，保存于4℃中。
[制備ZAPⅡ文庫的單鏈cDNA]
1.在一個50ml的圓錐形離心管中，加宿主菌250μl到SM液中：
SM液：20mMTrispH7.5
100nmNaCl
10nMMgSO4
0.2%Gelatin
2.37℃保溫15分鐘后，加5ml2×YT（其中每升溶液含10gNaCl,10g酵母提取物，16g胰酶解胨），37℃搖5小時。
3.然后在70℃保溫20分鐘。
4.4000g離心5分鐘，以除去細菌裂解碎片。回收上清液。這里應含有誘導得到的單鏈重組噬菌體，同樣還會有輔助噬菌體。滴度可以按細菌的形成單位來計算。