一)、ABC法：
(注，下面各種方法，均為手工操作，如沒特別說明，均在室溫下進行)
1.切片經二甲苯Ⅰ 5分鐘。
2.切片經二甲苯Ⅱ 5分鐘。
3. 無水酒精Ⅰ 30秒。
4. 無水酒精Ⅱ 30秒。
5. 95% 酒精Ⅰ 30秒。
6. 95%酒精Ⅱ 30秒。
7. 90%酒精 30秒。
8.80%酒精 30秒。
9. 70% 酒精 30秒。
10.自來水洗。(后面的切片脫蠟至水一般都是1-10)
11.0.3%H2O2甲醇處理切片10-20分鐘。
12.水洗。
13.抗原修復。
14.PBS洗3次，1分鐘/次。
15.加入血清孵育 20分鐘。
16.摔干血清，加入一抗60分鐘。
17.PBS洗3次，2分鐘/次。
18.加入二抗孵育30分鐘。
19.PBS 洗3次，2分鐘/次。
20.加入ABC復合物，孵育30分鐘。
21. PBS洗3次，2分鐘/次。
22.DAB-H2O2 孵育切片5-10分鐘。
23.PBS洗，水洗。
24.Harris蘇木素染核5-10分鐘。
25.水洗，分化，藍化，脫水，透明并封固。
(二)、LSAB法。(SP法)(Labelled streptavidim biotln)
1.切片脫蠟至水。
2.0.3%H2O2甲醇處理切片10-20分鐘。
3.水洗。
4.抗原修復。
5.PBS洗3次，1分鐘/次。
6. 加入血清孵育10分鐘。
7.摔去血清，加入一抗孵育30-60分鐘。
8.PBS洗3次，每次2分鐘。加入二抗，孵育20分鐘。
9.PBS 洗3次，每次2分鐘。
10.加入SP復合物孵育20-30分鐘。
11.PBS洗3次，每次2分鐘。
12.DAB-H2O2孵育5-10分鐘。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris蘇木素染核5-10分鐘。
15.水洗，分化 ，藍化，脫水，透明并封固。
(三)真空負壓LSAB法
1.切片脫蠟至水。
2. 0.3%H2O2甲醇真空負壓處理5min.
3. 水洗。
4.如果需要，可進行抗原修復。
5.PBS洗3次，每次1分鐘。
6.加入正常血清真空負壓處理5min。
7.摔干血清，加入第一抗體，真空負壓處理5分鐘。
8. PBS洗3次，每次2分鐘。
9. 加入二抗(即連接抗體)真空負壓處理5分鐘。
10.PBS洗3次，每次2分鐘。
11.加入鏈卵蛋白復合物，真空負壓處理 5分鐘。
12.PBS 洗3次，每次2分鐘。
13.DAB-H2O2孵育5-10分鐘。
14.PBS洗，水洗。
15.染核，分化，藍化，脫水，透明并封固。
注：真空負壓即將真空干燥中抽成真空。負壓達66.7KPa(500mmHg)
(四)Envision TM Systems.
1.切片脫蠟至水。
2.0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
3.水洗。
4.抗原修復。
5.PBS 洗3次，每次1分鐘。
6.加入一抗體孵育30-60分鐘。
7.PBS洗3次，每次2分鐘。
8.加入增強劑孵育20-30分鐘。
9.PBS洗3次，每次2分鐘。
10.加入酶標抗兔/鼠，復合物，孵育20-30分鐘。
11.PBS洗3次，每次2分鐘。
12.DAB-H2O2孵育5-10分鐘。
13.PBS洗，水洗。
14.Harris 蘇木素染核5-10分鐘。
15.水洗，分化，藍化，脫水，透明并封固。