多數有機藥物分子中含有能吸收紫外可見光的基團,從而顯示特征吸收光譜,這是紫外-可見光譜鑒別法的依據。鑒別時一般采用對比法,按規定的方法配制供試品溶液與對照品溶液,通過對比吸收光譜的特征數據、吸收度或吸收系數、吸收光譜的一致性等進行鑒別。由于紫外-可見吸收光譜比較簡單,光譜的曲線形狀變化不大,專屬性不如紅外光譜,同一物質圖譜相同,但圖譜相同的卻不一定為同一物質。但由于紫外-可見分光光度法比較方便,所以制劑的鑒別一般不采用紅外分光光度法,而采用紫外-可見分光光度法。
紫外-可見分光光度法應用時,主要有以下幾種方式。
(1)規定波長處最大或最小吸收,一般是特征吸收波長位置(λmax或λmin)。
如鹽酸偽麻黃堿鑒別項下要求“取本品,加水制成每1mL中含0.5mg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在251nm、267nm與263nm的波長處有最大吸收”。
如芬布芬鑒別項下要求“取本品,加無水乙醇制成每1mL中約含5μg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在281nm的波長處有最大吸收,在238nm的波長處有最小吸收”。
(2)測定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸光度。
如棕櫚氯霉素鑒別項下要求“取本品,加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含20μg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在271nm波長處有最大吸收,其吸光度約為0.35”。
(3)吸收系數法:測定吸收波長,計算吸收系數。
如氫化可的松性狀項下要求“取本品,精密稱定,加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1m.中約含10μg的溶液,照紫外-可見分光光度法,在242mm的波長處測定吸光度,吸收系數
為422～448”。
(4)吸光度比值法:測定不同波長處的吸光度,比值在一定范圍內。可以是吸收峰與吸收峰的比值,也可以是吸收峰與吸收谷的比值。
如丙酸倍氯米松鑒別項下要求“取本品,精密稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每1mL中約含20μg的溶液,照紫外-可見分光光度法測定,在239nm的波長處有最大吸收,吸光度為0.57～0.60;在239nm與263nm的波長處的吸光度比值應為2.25～2.45”。
(5)樣品經化學處理后,測定反應生成物的吸收光譜特性。
以上方法可以單個應用,為了提高鑒別的專屬性,也可以幾種方法結合起來使用,如丙酸倍氯米松的鑒別。