常見實驗用溶液的配制方法（二）

發布時間：2020-02-25 23:05 原文鏈接：常見實驗用溶液的配制方法（二）

Tris緩沖液(Tris-HCl buffer)

　　將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N)，用水調整終體積至1L。

濃鹽酸的體積（ml）	pH
8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76	9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2

　　二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

　　電泳緩沖液

　　50×Tris-乙酸(TAE)緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris堿 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水	242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）補足1L

　　5×Tris-硼酸(TBE)緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris堿 445 mmol/L 硼酸鹽 10 mmol/L EDTA 水	54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）補足1L

　　染料

　　1%溴酚藍(bromophenol blue)

　　加1g水溶性鈉型溴酚藍于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

　　1%二甲苯青FF(xylene cyanoleFF)

　　溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

　　10mg/ml的溴化乙錠(ethidium bromide)

　　小心稱取1g溴化乙錠，轉移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

　　凝膠上樣液(gel loading solutions)

　　6×堿性凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氫氧化鈉 6 mmol/L EDTA 18％聚蔗糖（400型） 0.15％溴甲酚綠 0.25％二甲苯青FF 水	300ul 10N 氫氧化鈉 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 補足到10ml

　　6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15％聚蔗糖（400型）水	1.5ml 1％溴酚藍 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 補足到10ml

　　6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚藍 0.25％二甲苯青FF 15％聚蔗糖（400型）水	2.5ml 1％溴酚藍 2.5ml 1％二甲苯青FF 1.5g 補足到10ml

　　6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50％甘油水	1.5ml 1％溴酚藍 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml

　　6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚藍 0.15％二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40％聚蔗糖水	1.5ml 1％溴酚藍 1.5ml 1％二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 補足到10ml

　　10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚藍 0.2％二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1％SDS 50％甘油水	20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10％ SDS 5ml 補足到10ml

　　三.常用培養基

　　LB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	10g
酵母提取物	5g
氯化鈉	10g

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)調整pH至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　　SOB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	20g
酵母提取物	5g
氯化鈉	0.5g
1 mol/L 氯化鉀	2.5ml

　　用水補足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。

　　SOC培養基

　　成分、方法同SOB培養基的配制，只是在培養基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)。

　　TB培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	12g
酵母提取物	24g
甘油	4ml

　　各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/LKH₂PO₄/0.72 mol/L K₂HPO₄的溶液(2.31g的K₂HPO₄和12.54gK₂HPO₄溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。

　　2×YT培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	16g
酵母提取物	10g
氯化鈉	4ml

　　如果需要用1N NaOH(～1ml)調整pH至7.0，再補足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。

　　YPD培養基

　　將下列組分溶解在0.9L水中：

蛋白胨	20g
酵母提取物	10g
葡萄糖	20g

　　用水補足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對色氨酸營養缺陷型每升培養基添加1.6g色氨酸，因為YPD培養基是色氨酸限制型培養基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。

　　四.常用抗生素(antibiotic)

　　氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

　　溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長培養基。

　　卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

　　溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

　　溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)

　　溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

　　溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

　　四環素(tetracyyline)(10mg/ml)

　　溶解100mg四環素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長培養基。

更多與常見實驗用溶液的配制方法（二）相關的新聞

儀器

杭州匯爾 SW-CJ-1D 微生物實驗室設備清單