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  • 發布時間:2020-05-18 18:48 原文鏈接: 應用TargetMS2方法對大鼠血漿中人重組干擾素進...(三)

    3.2 標準曲線繪制

    人重組干擾素α-2b 酶解的標準肽段稀釋成以下幾個濃度:104ng/ml,103ng/ml,102ng/ml,101ng/ml,100ng/ml,10-2ng/ml,各自吸樣8ul, 與10ul 空白血漿酶解的肽段樣本混勻,上樣18ul,質譜檢測,檢測方法使用TargetMS2,inclusion list 為m/z 451.75,isolation window 為4 m/z。對子離子458.31 進行抽提,結果見下圖。

     

     

    從上圖可以看出,所有6 個濃度的標準品均在36min 左右有一個色譜洗脫峰出現,與上述標準品的洗脫時間一致,該色譜峰為451.75-458.31 母離子- 子離子對的色譜峰,即EDSILAVR 的洗脫峰,分別對各個色譜峰的峰面積(即上圖中色譜峰上顯示的MA 數值)進行積分,結果見下述表格。

     

     

     

     

    從上述結果中可以看出,在6 個數量級的濃度范圍內,濃度與峰面積的線性相關系數在0.99 以上,說明Q-Exactive的檢測動態范圍足夠大,可以很好的應用于蛋白質藥物代謝動力學研究。

     

    3.3 大鼠血漿樣本中人重組干擾素α-2b 濃度的測定

     

    大鼠血漿樣本上樣18ul,質譜檢測,原始結果見下圖,圖中可見在35.33min 有一個明顯的色譜洗脫峰出現,洗脫時間與上述的標準品的洗脫時間相一致,為血漿樣本中的人重組干擾素α-2b 的肽段EDSILAVR 的洗脫峰,對m/z 458.31 這一子離子的面積進行積分。

     

     

    峰面積為9787, 代入上述的標準曲線中進行計算,得出原始血漿中人重組干擾素α-2b 濃度為26.9185 ng/ml。

     

    4 總結

    綜上所述,Q-Exactive 擁有超高的靈敏度,在不到500ng 上樣量的情況下對人重組干擾素α-2b 的氨基酸序列匹配度達到了98.2%;Q-Exactive 擁有足夠高的動態范圍,在對人重組干擾素α-2b 的標準品檢測中,其動態范圍達到了6個數量級,并且線性相關系數達到了0.99 以上。簡而言之,Q-Exactive 的超高性能可以很好的應用于大分子藥物代謝的研究中去。


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