關于抽提質粒：
1） 抽提質粒時，加入 Solution II和 III后要求輕柔混勻。我個人覺得不用這樣，只要不是
非常劇烈，可以快速混勻。尤其可以運用在一次抽提多管質粒的時候，這樣可以快速，而且
效果一點也不差。
2） 抽提質粒時，用無水乙醇沉淀的時間可以由實驗操作者來決定，如果時間充裕可以 30
min，否則 8-10 min 也可以。至于溫度，個人覺得-20℃好于常溫。如果加入可醋酸鈉，會較
容易形成鹽類雜質，所以時間短一些更好！
3） 質粒小提如果是用作鑒定或酶切，不必進行酚仿抽提，將溶液 1，2，3 離心后的清液移
入一個新的 1.5ml 離心管中，再次離心 3-5 min，小心取出上清液后，直接沉淀，不必擔心
DNA 切不開，我已經這樣使用一年多，沒出過什么問題。當然這樣的質粒不很干凈，但是
做鑒定足夠了。尤其是實驗室女同胞們，可以減少酚仿的侵害，而且節省時間。
4）有時沉淀東西，由于沉淀量很少，離心完之后不知道到底有沒沉淀下來東西，由于量很
少，不好觀察，所以離心時建議按特定的方向放置離心管，這樣你就可以在離心之前確定沉
淀該沉淀到管子的大致部位，這樣離心后就可直接觀察那有沒有沉淀，避免滿管子找，另外
看沉淀時可以對光看，這樣就是顆粒狀的細小沉淀也能看見的，我覺得我們制備好了一批感
受態，最好馬上轉化一種已知質粒。與此同時，取一點感受態接種到含抗性的固/液體培養
基培養來做對照。這樣第二天即可以知道這批感受態是否還有外源質粒，又可以知道這批感
受態轉化效率的高低。如果合格，那以后就可以放心使用！因為我也曾經遇到其實是因為感
受態不好而導致試驗不成功，但是當時不知道，結果費時費力。
5）提取質粒的時候，最后一步的酒精揮發很關鍵，基本上是其后續的酶切反應的決定性因
素。所以這一步盡量揮發長一點時間，最好是空調吹熱風，或是 37℃溫箱放長一點的時間，
我試過室溫過夜，酶切很好。
6）在做克隆鑒定的時候經常需要在酶切鑒定前進行 PCR 鑒定，每次配置 PCR 反應液很繁
瑣，可以將其配置類似 Kit 的形式，按你需要的反應體系列表，然后放大 100 倍配置 100×
主反應液（100 次反應），其中含 Buffer，Mg2＋，dNTPs，但不含引物和 Taq 酶，然后可以
10×分裝或一管儲存在-20℃，在需要的時候拿出融開，然后按所需的 PCR 反應個數吸取相
應的倍數，再補加相應反應倍數的 Taq 和引物，混勻后分裝，這樣做的好處如下： 1）節省
時間；2）避免每次反應加樣不均的可能；3）大大減少 PCR假陽性的產生。