一、操作程序簡述
1濕法分析包括下列內容:①濁度,②凝集;②精子計數及其活動力評估o
2.活動擺子百分率及其動力學測定①主觀方法;②客觀方法。徠卡顯微鏡
3.稿子計數①血細胞計數器;②Msrkler計數池;③計算機輔助的精液分析(con-Puter-assistedsemenanalysis,CASA)。
4.制備精液讀片桔液涂片、精液染色、形態學分析。
在確定精子數量和活動力過程中,無論采用何種技術,對每一個精液樣品均需用濕法或“濕操作”.此法將使檢驗人員對稿于計致、活動情況和有關動力學具有一個初步的主觀印象,并可測定濁度和強度;在測定稿子計數及其活動力過程中,溫度顯得很重要。顯然,37°是zui優選擇;然而,如缺乏調節溫度的顯微鏡操作臺,整個分析過程要在此條件下完成是不可能的。通常.精液分析在室溫中進行。正如人們所知.室溫變化范圍很大,因此,必須盡量控制操作區域的溫度。
(一)方法
精液完全液化后,充分混勻,加一滴未稀釋桔液于干凈玻片上,蓋上蓋玻片。也可用自動加樣器吸lo微升精濃加至載玻上以提高測定的可重復性。在放大200—400倍(高倍鏡)的情況下觀察20個視野,評價活動稻子的百分率、相對運動速度和方向以及每一高倍視野下的精于數,評價其濁度和是否有凝塊,確定“圓形細胞”(未成熟微生物細胞和白細胞)的百分率。
(二)濁度
顯然,成熟館子在精掖中占多數。但有時也會發現其他細胞或碎片。來自男性生殖道的亡皮細胞也會存在于精液中。在高倍鏡下,偶爾發現上皮細胞并非病理指征。但息尿道炎的男子其棺液中可出現大量上皮細胞;有時亦可見陰道源性的上皮細胞,這種情況表明俏液樣品是經性交中斷法收集的.此類細胞應在報告單上注明。徠卡顯微鏡
不成熟的病原茵細胞和白細胞也常在精液中出現,在染色破片上難以區別,而應用濕法操作法則更不可能。通常用巴氏(Papnicolaou,PAP)染色來觀察這種“圓形細胞“(大于或等于成熟稻子的10%);而濕法分析有助于確定哪些樣本需用這一方法進一步制備。應對白細胞的確切數目和不成熟病原茵的百分串加以確定和記錄(詳見后述)。
在精液中,還可能出現其他顆粒性物質如梢膚結晶、滑石粉和殺桔劑顆粒,如發現量很大,則應加以記錄。粗大茵體、毛滴蟲、念珠菌更應加以報告。
(三)凝集
徠卡顯微鏡在某些(非全部)含抗精子抗體的桔液樣本中,精于可能發生自發性凝集,應在主觀判斷的基礎上加以報告并記錄凝集類型和程度,凝集程度的評價用0-Ⅳ表示(表44)。精子凝集方式注明為:頭—頭、頭—尾、尾—尾或混合型。有時出現格子粘附于碎片或其他顆粒性物質的現象,應與真性凝集區別開來。這種現象除非根嚴重,否則一般不作報告。出現精于凝集提示應作特異性抗精子抗體的檢測(見有關章節)。
(四)評估精于數、活動率及其動力學
在精液分析報告中應記錄棺子數,避免出現少數、幾個、很多、大量館子等主觀性估計。但是,如果每高倍視野觀察到大量精子而實際計數所反映數量有所下降,應該懷疑結果的難確性,并重新化驗;徠卡顯微鏡此外,還應對精子活動串(25%、50%、75%或大于80%)和動力學特征(緩櫻隨意運動和快速直線運動)作出主觀評價,并與以客觀方法測定的結果相比較。顯然這種方法的主觀性很強,在測定者之間甚至同一測定者身上易產生差異。然而,這些“主觀的粗略分析”常會提示客觀分析方法的潛在錯誤。
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