一、實驗的目的和內容
目的：掌握微生物接種和分離純化技術，掌握無菌操作技術。
內容：用平板劃線法分離微生物；學習斜面接種及穿刺接種等無菌操作技術。
二、基本原理
在自然界中，各種微生物是在互為依賴的關系下共同生活的。因此，為了取出特定的微生物進行純培養，必須從中把他們分離出來。
微生物接種技術是進行微生物實驗和相關研究的基本操作技能。無菌操作是微生物接種技術的關鍵。接種是將微生物或微生物懸液引入新鮮培養基的過程。由于實驗目的、培養基種類及實驗器皿等不同，所用接種方法不盡相同。斜面接種、液體接種、固體接種和穿刺接種操作均以獲得生長良好的純種微生物為目的。
分離培養微生物時，要考慮微生物對外界的物理、化學等因素的影響。即選擇該類微生物最適合的培養基和培養條件。在分離、接種、培養過程中，均需嚴格的無菌操作，防止雜菌侵入，所用的器具必須經過滅菌，接種工具無論使用前后都要經過滅菌，且在無菌室或無菌箱中進行。
三、 材料及器材
（一）菌種：大腸桿菌、枯草桿菌，金黃色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培養基：肉湯培養基試管斜面，肉湯半固體培養基，肉湯固體培養基試管斜面，肉湯固體培養基平板，查氏培養基試管斜面，查氏培養基平板。
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（三）儀器及其他工具：接種環，接種針，接種鉤，鑷子，酒精燈，火柴，酒精棉，試管架，標簽紙，恒溫培養箱等。
四、方法與步驟
（一）接種。
1、試管菌種轉接：
試管細菌菌種轉接主要用于菌種的活化、分離、純化。
（1）將菌種試管與待接種的試管培養基依次排列，挾于左手的拇指與其他四指之間，用右手的無名指與小指和手掌邊拔出棉塞并挾住。
（2）置試管口于酒精火焰附近。
（3）將接種工具垂直插入酒精火焰中燒紅，再橫過火焰3次，然后再放入有菌試管中，在管壁上停留片刻待其冷卻。
（4）取少許菌種置于另一支試管中，按一定的接種方式把菌種接種到新的培養基上。
（5）取出接種工具，試管口和棉塞進行火焰滅菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）燒死接種工具上的殘余菌，把試管和接種工具放回原處。
（8）在斜面管口寫明菌種名稱、日期，置37℃恒溫培養18—24小時，進行觀察。
2、試管菌種接種到平板培養基：
試管細菌菌種轉接到平板培養基主要用于菌種的分離、純化。
（1）左手持試管菌種，右手松動試管棉塞，燒接種工具。
（2）右手小指與手掌邊取下棉塞，取菌，打開平皿。
（3）將菌種接種到平皿上，采用平板劃線法（分區劃線或連續劃線），然后立即蓋上平皿。
（4）在酒精燈火焰上灼燒接種工具滅菌。
（5）棉塞過火，重新塞入試管。
（6）在平皿底寫明菌種名稱、日期，倒置于37℃恒溫培養18—24小時，進行觀察。
3、液體培養基接種
液體培養基接種主要用于微生物的增菌培養。
（1）用滅菌的接種環挑取細菌菌種迅速移到肉湯培養基管，涂于接近液面的傾斜的管壁上，并輕輕研磨，再直立試管，菌種即溶于肉湯中。
（2）灼燒接種環，放回原處。兩試管口經火焰滅菌后塞上棉塞。
（3）在斜面管口寫明菌種名稱、日期，直立于37℃恒溫培養24小時，進行觀察。
4、半固體培養基接種
半固體培養基接種主要用于檢查細菌的運動性。
（1）按試管菌種轉接法握持菌種管和半固體培養基管，靠近火焰。
（2）將接種針在火焰上燒灼滅菌，冷卻后從菌種管中挑取少許大腸桿菌菌苔，迅速移至肉湯瓊脂半固體培養基管中。
（3）將接種針從培養基礎中央垂直剌入至管底3/4處，然后原路退出。接種針不能在培養基中左右移動。
（4）試管口經火焰滅菌后，塞上棉塞。灼燒接種針。用同樣方法接種一管金黃色葡萄球菌做對照。
（5）在半固體培養基管上寫明菌種名稱、日期，直立于37℃恒溫培養24小時，進行觀察。
（二）分離：
分離微生物的方法很多，其目的都是把混雜的微生物分離為單個細胞使其生長繁殖，形成單個菌落，以便得到純菌種。本實驗以平板劃線法分離。
1、在無菌條件下，分別取一接種細菌放入盛有無菌水的試管中，制成混合菌液。
2、在近火焰處，左手拿平板稍抬皿蓋，右手持接種環蘸取一環混合液伸入皿內劃線。
3、將接種分離后的細菌放在37℃的恒溫箱內，培養24h后觀察。