一、無菌操作要求
微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多實驗要求在無菌的條件下進行，主要原因，一是防止試驗操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。要求如下：
1.1 接種細菌時必須穿工作服、帶工作帽；
1.2 進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應放在無菌室緩沖間，工作前經紫外線消毒后使用；
1.3 接種食品樣品時，應在進無菌室前用肥皂洗手，然后用酒精棉球將手擦干凈；
1.4 進行接種所用的吸管、平皿及培養基等必須經消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用酒精點燃燒灼三次后使用；
1.5 從包裝中取出吸管時，吸管尖部不能觸及試管或平皿邊；
1.6 接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌活樣品時，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒；
1.7 接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲，必要時還要燒到針和環與桿的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min，再經火焰燒灼；
1.8 吸管吸取菌液或樣品時，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。
二、無菌間使用要求
2.1 無菌間應密封，不得隨意打開，并設有與無菌間大小相應的緩沖間及門，另盡量設有的小窗，以備進入無菌間后傳遞物品。
2.2 無菌間應保持清潔，工作后用煤酚皂液溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與試驗無關的物品；
2.3 無菌間使用前后應將門關緊，打開紫外燈，如采用室內懸掉紫外燈消毒時，需30W紫外燈，距離工作臺1m處，照射時間不少于30分鐘，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精球輕輕擦拭，除去上面的灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響；
2.4 處理和接種食品標本時，進入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞；
2.5 在無菌間需用安裝空調時，則應有過濾裝置。
三、消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被污染和接種的培養物等，必須經滅菌后方能使用。
3.1 滅菌前準備
3.1.1 所有需經滅菌的物品首先要清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面氣孔打開。
3.1.2 裝培養基的三角瓶塞好棉塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
3.2 裝放
3.2.1 大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品不應超過鍋內容積的80%，物品應放置鍋內擱架上或鐵絲筐中。
3.2.2 手提式高壓鍋：將物品分別包扎好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。
3.3 設備檢查
3.3.1 檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
3.3.2 壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。
3.3.3 對有自動電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合于進行滅菌處理的要求。
3.4 滅菌處理
手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：
3.4.1 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復使用時應將水量補足，水變混濁需要更換）。
3.4.2 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。
3.4.3 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放出冷氣（水沸騰后排氣10～15min）。
3.4.4 關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，并維持規定時間（按滅菌物品性質與有關情況而定）。
3.4.5 達到規定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸汽，待壓力恢復到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下再打開蓋取物，以防止突然減壓液體劇烈沸騰活容器爆破。
3.5 滅菌溫度與時間
3.5.1壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間見下表：
3.5.3 取出的物品掉落在地或誤放不潔之處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無菌物品使用。3.5.2 滅菌處理：滅菌后物品，劑等，應檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態，未達到者應廢棄。
3.5.4 取出的合格滅菌物品，應存放于貯藏室或防塵柜內，嚴禁與未滅菌物品混放。
3.5.5 凡屬合格物品，應標有滅菌日期及有效期限。