9．脂酶試驗
(1)原理：細菌產生的脂酶可分解脂肪為游離脂肪酸。在培養基中加入維多利亞藍可與脂肪結合成為無色化合物，如果脂肪被分解，則維多利亞藍釋出，呈藍色。
(2)方法：將待檢菌接種于含維多利亞藍的脂酶培養基中，置35℃孵育24h，觀察結果。
(3)結果：培養基變為深藍色者為陽性，否則可呈無色或粉紅色。
(4)應用：主要用于厭氧菌鑒定。在擬桿菌中產黑色素擬桿菌中間亞種產生脂酶，其它擬桿菌陰性；在梭菌屬中諾維梭菌和產芽胞梭菌也產生此酶，其它梭菌為陰性。
10．CAMP試驗
(1)原理：B群鏈球菌（無乳鏈球菌）產生一種“CAMP”因子，此種物質能促進葡萄球菌的β-溶血素的活性。因此，可在兩種細菌的交界處溶血力增強，出現箭頭型透明溶血區。
(2)方法：在羊血或馬血瓊脂平板上，先以β-溶血的金黃色葡萄球菌劃一橫線接種。再將待檢菌與前一劃線作垂直接種，兩者應相距1cm，于35℃孵育18~24h，觀察結果。每次試驗應做陰陽性對照。
(3)結果：兩種細菌劃線交接處出現箭頭型溶血區為陽性。
(4)應用：主要用于B群鏈球菌（陽性）的鑒定，其他鏈球菌均為陰性。
11．石蕊牛乳試驗
(1)原理：由于牛乳內含有豐富的蛋白質和糖類，各種細菌對這些物質的分解能力不同，故可有數種不同反應，用以鑒別細菌。
(2)將待檢菌接種于石蕊牛乳培養基中，若為芽胞梭菌，要在培養基中加入無菌鐵末，置35℃孵育18~24h，必要時可延長至14d。觀察結果。
(3)結果：①產酸：發酵乳糖產酸，使指示劑變為粉紅色。②產氣：發酵乳糖而同時產氣，可沖開上面的凡士林。③凝固：因產酸太多而使牛乳中的酪蛋白凝固。④胨化：將凝固的酪蛋白繼續水解為胨，培養基上層液體變清，底部可留有未被完全胨化的酪蛋白。⑤產堿：乳糖未發酵，因分解含氮物質，生成胺及氨，培養基變堿，指示劑變為藍色。
(4)應用：主要用于梭菌、鏈球菌和丙酸桿菌的鑒定。
五、抑菌試驗
1．Optochin敏感試驗
(1)原理：Optochin(奧普托欣)是鹽酸乙基氫化羥基奎寧的商品名。對肺炎鏈球菌有特異抑制作用，其作用機制可能是干擾葉酸生物合成作用，而對其它鏈球菌則無此作用。
(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養物均勻涂布于血瓊脂平板上，貼上一張含5μg奧普托欣紙片，置燭缸或二氧化碳孵箱，35℃ 孵育18~24h，觀察結果。
(3)結果：抑菌圈直徑大于14mm為敏感，小于或等于 14mm為陰性。
(4)應用：主要用于肺炎鏈球菌（敏感）與其它鏈球菌（耐藥）的鑒別。
2．桿菌肽敏感試驗
(1)原理：A群鏈球菌對桿菌肽幾乎是100%敏感，而其它群鏈球菌對桿菌肽通常耐藥。故此試驗可對鏈球菌進行鑒別。
(2)方法：用棉拭子將待檢菌的肉湯培養物均勻涂布于血瓊脂平板上，稍干后貼一張含0.04U的桿菌肽紙片，置35℃ 孵育18~24h，觀察結果。
(3) 結果：抑菌圈直徑大于10mm為敏感，小于10mm為耐藥。
(4)應用：主要用于A群與非A群鏈球菌的鑒別。從臨床分離的菌株中有5%~15%非 A群鏈球菌也對桿菌肽敏感，如6%的B群鏈球菌、7.5%的C群鏈球菌和G群鏈球菌等。
3．新生霉素敏感試驗
(1)原理：金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌可被低濃度新生霉素所抑制，表現為敏感，而腐生葡萄球菌則表現為耐藥。
(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于M-H瓊脂平板或血平板上，在平板中央貼含5μg/片新生霉素診斷紙片一張，置35℃孵育16~18h，觀察結果。
(3)結果：抑菌圈直徑大于16mm為敏感，小于或等于16mm為耐藥。
(4)應用：主要用于葡萄球菌某些種的鑒定。
4．O/129試驗
(1)原理：O/129（2，4二氨基-6，7-二異丙基喋啶）能抑制弧菌屬、發光桿菌屬和鄰單胞菌屬細菌生長，而氣單胞菌屬和假單胞菌屬細菌則耐藥。
(2)方法：用棉拭子將待檢菌菌懸液均勻涂布于堿性瓊脂平板上，將10μg/片及150μg/片的O/129診斷紙片貼于平板上，置35℃孵育18~24h，觀察結果。
(3)結果：出現抑菌圈者表示敏感，無抑菌圈者為耐藥。
(4)應用：主要用于弧菌屬、鄰單胞菌屬與氣單胞菌屬的鑒別，弧菌屬和鄰單胞菌屬菌為敏感，氣單胞菌屬菌為耐藥。其它菌屬有發光桿菌屬為敏感，假單胞菌屬為耐藥。
5．氰化鉀試驗
(1)原理：氰化鉀可抑制某些細菌的呼吸酶系統。細胞色素、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶均以鐵卟啉作為輔基，氰化鉀與鐵卟啉結合，使這些酶失去活性，使細菌生長受到抑制。
(2)方法：將待檢菌接種于氰化鉀培養基中，同時接種一支不含氰化鉀的對照培養基，置35℃孵育24~48h，觀察結果。
(3)結果：細菌在氰化鉀培養基中生長的（不受抑制）為陽性，不生長（抑制）為陰性。
(4)應用：腸桿菌科中的沙門菌屬、志賀菌屬和埃希菌屬細菌的生長受到抑制，而其它各菌屬的細菌均可生長。
六、其它試驗
1．克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養基試驗
(1)原理：克氏雙糖鐵(KIA)或三糖鐵瓊脂(TSI)培養基制成高層和短的斜面，其中葡萄糖含量僅為乳糖或蔗糖的十分之一，若細菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，分解葡萄糖產酸使pH降低，因此斜面和底層均先呈黃色，但因葡萄糖量較少，所生成的少量酸可因接觸空氣而氧化，并因細菌生長繁殖利用含氮物質生成堿性化合物，使斜面部分又變成紅色；底層由于處于缺氧狀態，細菌分解葡萄糖所生成的酸類一時不被氧化而仍保持黃色。細菌分解葡萄糖、乳糖或蔗糖產酸產氣，使斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。細菌產生硫化氫時與培養基中的硫酸亞鐵作用，形成黑色的硫化鐵。
(2)方法：用接種針挑取待檢菌的菌落，先穿刺接種到KIA或TSI深層，距管底3~5mm為止，再從原路退回，在斜面上自下而上劃線，置35℃孵 育18~24h，觀察結果。
(3)結果：常見的KIA反應有如下幾種：
①斜面堿性/底層堿性：不發酵碳水化合物，系不發酵菌的特征。如銅綠假單胞菌。②斜面堿性/底層酸性：葡萄糖發酵、乳糖（和TSI中的蔗糖）不發酵，是不發酵乳糖菌的特征，如志賀菌。
③斜面堿性/底層酸性（黑色）：葡萄糖發酵、乳糖不發酵并產生硫化氫，是產生硫化氫不發酵乳糖菌的特征。如沙門菌、亞利桑那菌、枸櫞酸桿菌和變形桿菌等。
④斜面酸性/底層酸性：葡萄糖和乳糖（和TSI中的蔗糖）發酵，是發酵乳糖的大腸菌群的特征，如大腸埃希菌、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。
(4)應用：鑒別腸道桿菌用。KIA或TSI對初分離出的、可疑為革蘭陰性桿菌鑒定特別有用。其反應模式是許多桿菌鑒定表的組成部分，也可作為觀察其他培養基反應的有價值的質控依據。
2．氫氧化鉀拉絲試驗
(1)原理：革蘭陰性細菌的細胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化鉀菌懸液呈現粘性，可用接種環攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細菌在稀堿溶液中沒有上述變化。
(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液（應新鮮配制）于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環，觀察能否拉出粘絲。
(3)結果：用接種環拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。
(4)應用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數革蘭陰性菌于5~10s內出現陽性反應，有的則需30~45s，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產堿桿菌、莫拉菌等大多數在10s內呈陽性，不動桿菌、莫拉菌反應較慢，大多數菌株在60s內出現陽性，而革蘭陽性菌在60s以后仍為陰性。
第四節 血清學試驗
血清學試驗是根據抗原與相應的抗體在適宜的條件下，能在體外發生特異性結合的原理，用已知抗體或抗原來檢測未知抗原或抗體。因抗體主要存在于血清中，抗原或抗體檢測時一般都要采用血清，故體外的抗原抗體反應亦稱為血清學試驗或血清學反應。血清學試驗包括血清學鑒定和血清學診斷。血清學鑒定即用含已知特異性抗體的免疫血清(診斷血清)去檢測患者標本中或培養物中的未知細菌或細菌抗原，以確定病原菌的種或型。血清學診斷是指用已知抗原檢測病人血清中的相應抗體，以診斷感染性疾病的方法。血清學試驗是臨床微生物學檢驗的重要方法之一。血清學試驗基本類型包括凝集反應、沉淀反應和補體結合反應等。
一、凝集反應
顆粒性抗原（細菌、紅細胞、乳膠等）與相應抗體可發生特異性結合，在一定條件下（電解質、pH、溫度、抗原抗體比例適合等）出現肉眼可見的凝集小塊，稱為凝集反應。參與反應的抗原稱凝集原，抗體稱為凝集素。凝集反應可分為直接凝集反應和間接凝集反應兩大類。
(一)直接凝集反應
直接凝集反應指顆粒性抗原與相應抗體直接結合出現的凝集現象。
1. 玻片凝集試驗
是一種定性試驗。用己知抗體(診斷血清)測未知抗原，適用于細菌的鑒定或分群（型）等。方法是取已知抗體（診斷血清）滴加在載玻片上，直接從培養基上刮取待檢菌混勻于診斷血清中，數分鐘后，如出現細菌凝集成塊或肉眼可見的顆粒，即為反應陽性。自臨床初分離的細菌中，有些細菌表面含有某種表面抗原(如傷寒沙門菌的Vi抗原和志賀菌屬的K抗原等)，這些抗原能阻止菌體抗原(O抗原)與相應抗體發生凝集反應，從而導致錯誤的判定。此時應將菌懸液于100℃中隔水煮沸(Vi抗原100℃30min
、 K抗原100℃ 1h)，待細菌表面抗原破壞后，再進行試驗。
凝集試驗簡便、快速、特異性強，常用于沙門菌、志賀菌、致病性大腸埃希菌、霍亂弧菌、布氏桿菌、流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌及鏈球菌等的鑒定。
2．試管凝集試驗
為半定量試驗。用等量抗原(細菌)懸液與一系列遞倍稀釋的抗血清混合，37℃保溫4h后放室溫或4℃冰箱過夜，觀察結果。根據每管內抗原的凝集程度判定血清中抗體的相對含量。以血清最高稀釋度仍有明顯凝集現象者，為該血清中抗體的凝集效價，以表示血清中抗體的相對含量。
本法常用于測定免疫血清的效價、抗原的凝集性能；在臨床上主要用于檢測受試者血清中有無某種特異性抗體及其相對含量。如診斷傷寒、副傷寒的肥達反應、診斷布氏桿菌病的瑞特反應等。
(二)間接凝集反應
是將可溶性抗原或抗體吸附于某種與免疫無關一定大小的顆粒載體表面，制成致敏載體，再與相應抗體或抗原作用，在電解質存在的適宜條件下，被動地使致敏載體凝集，稱為間接（或被動）凝集反應。
可用紅細胞、聚苯乙烯乳膠、活性炭等顆粒作載體，分別稱間接血凝、間接乳凝、間接炭凝試驗。由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應面積，當顆粒上的抗原與少量抗體結合后，就能出現肉眼可見的反應，故可提高反應的敏感性。常用間接凝集反應來測定待檢血清中細菌、病毒、螺旋體、寄生蟲等抗原及自身抗體。間接凝集反應又可分為如下3種。
正向間接凝集試驗
即將已知可溶性抗原吸附于載體顆粒上，然后與相應抗體結合產生顆粒凝集現象，用以檢測未知抗體。
反向間接凝集試驗
是將已知抗體吸附于載體顆粒表面，以檢測相應可溶性抗原的凝集反應。適用于可溶性和顆粒性抗原的檢出，如反向間接血凝試驗檢測乙型肝炎表面抗原及甲胎蛋白，協助診斷乙型肝炎和原發性肝癌。從食品中檢出肉毒毒素和葡萄球菌腸毒素等。
間接凝集抑制試驗
是將已知抗體或可溶性抗原先與被測的抗原或抗體混合，然后加入有關抗原或抗體致敏的載體顆粒，如已知抗體或可溶性抗原與被測的抗原或抗體相結合，則不出現顆粒凝集現象。故也可稱為正向間接凝集抑制試驗或反向間接凝集抑制試驗。
協同凝集試驗
協同凝集反應屬于間接凝集反應的一種類型。它所用的載體是含SPA（葡萄球菌A蛋白）金黃色葡萄球菌。
SPA能與人及多種哺乳動物血清中IgG類抗體的Fc段結合，IgG的Fc段與SPA結合后，IgG的兩個Fab
段暴露于葡萄球菌菌體的表面，并仍保持正常的抗體活性，當結合于葡萄球菌表面的已知抗體與相應細菌、病毒或毒素抗原接觸時，則出現肉眼可見的凝集現象。方法簡便、快速、敏感性高，易于觀察結果，已廣泛用于細菌的快速鑒定和分群（型），如腦膜炎奈瑟菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、布魯氏菌、沙
門菌及志賀菌等細菌。