1. 涂片取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無菌操作，分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，涂片必須均勻。
2. 干燥于室溫中自然干燥。
3. 固定涂片面向上，于火焰上通過2-3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細菌形態將毀壞。
4. 染色放標本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏堿性美藍染色液約染2~3分鐘，石炭酸復紅染色液約染1~2分鐘。
5. 水洗染色時間到后，用自來水沖洗，直至沖下之水無色時為止。注意沖洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接沖在涂片處。沖洗后，將標本晾干或用吹風機吹干，待完全干燥后才可置油鏡下觀察。
6. 鏡檢：顯微鏡觀察。
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