微生物酯酶的分離純化技術

1 膜處理技術

　　微生物發酵液以橫過膜表面的方式經過過程錯流膜，液流清掃膜表面的溶質層，使溶質無法積聚在膜表面處，從而截留微生物細胞和濃縮含酶發酵液，從而達到分離純化的目標。Sztajer等用毛細管超濾膜純化Pseudomonas fluorescens脂肪酶，他們比力了2種毛細管超濾膜：內徑1.1mm截斷相對分子質量為10kDa的聚丙烯腈和聚砜。對PS而言，僅不美觀察到濃縮后果，合適濃縮酶；而PAN除了濃縮，還除往雜蛋白可應用于初分離。

　　2 免疫親和純化技術

　　免疫親和純化技術是一種高效選擇性的蛋白質純化技術。經過過程一步純化，純化倍數可達1 000-10 000。免疫純化技術大部分是應用單克隆抗體和多克隆抗體，選擇性依附于單克隆抗體對目標蛋白的特異性程度及對雜蛋白的影響。免疫親和純化具有以下特點：①抗體與其響應抗原結合具有高度親和力和特異性，能大量分離天然狀況或近似天然狀況的抗原；②不是所有的抗體都實用于免疫親和純化，但一旦獲得一種性能優勝的抗體，純化過程就很快速并且可靠；③可按照不同規模進行，半天內即可完成，并且可以獲得其他層析法不成相比的純化后果；④經過簡單的改進，免疫親和法也可用于純化針對不同抗原的特異性抗體。Bandmann等在所有突變體的N末尾引進IgG結合位點，構建融合蛋白，應用IgG與靶位點特異性結合的免疫方法純化了E. coli表達的脂肪酶突變體角質酶。

　　3 反膠束萃取技術

　　反膠束萃取是指當有機溶劑中加進的表面活性劑濃度超過其臨界值時，表面活性劑在溶液中形成反膠束，非極性基團在外，極性基團則擺列在內，形成一個極性核，此極性核具有消融極性物質的才能，當含有此種反膠束的有機溶劑與蛋白的水溶液接觸后，蛋白及其他親水性的物質可以或許溶于極性核內部的水中，由于四周的水層和極性基團的庇護，蛋白不與有機溶劑接觸，從而不會造成掉活，實現對蛋白質的萃取。

　　用于反膠束萃取常用的有機溶劑是異辛烷，反膠束萃取的表面活性劑主如果陰離子丁二酸-2-乙基己基酯磺酸鈉和陽離子表面活性劑氯化三辛基甲基銨。為了進一步進步反膠束萃取分離的選擇性，可在反膠束表面活性劑的烷基上連接對蛋白質具有生物專一性的配基，實現反膠束親和萃取分離。