快速了解冷凍含水超薄切片

　　冷凍超薄切片技術是在光學顯微冷凍切片和電鏡超薄切片的基礎上發展起來的。由于常規超薄切片技術中應用化學固定、有機溶劑脫水、樹脂包埋等一系列處理，均可使生物樣品受到物理和化學性損傷，引起組織和細胞內蛋白質分子變性，大部分可溶性成分及某些生物大分子物質被抽提或發生移位。為了彌補這些缺陷，人們創造了冷凍超薄切片技術。70年代后，出現商品冷凍超薄切片裝置，使該技術有了更大發展。目前，此技術可在分子水平上研究新鮮生物樣品的超微結構、各種生物大分子和某些元素在細胞內的分布狀態，并在細胞化學、免疫電鏡、X射線微區分析及可溶性物質放射自顯影研究等方面發揮巨大作用。

　　超薄切片技術主要操作程序：

　　1.樣品預處理。包括兩種方法:一種是樣品直接冷凍固定，該法有利于保存生物樣品中可溶性物質及生物大分子的活性、天然構型和保持元素的分布狀態，主要用于生物樣品內可溶性物質的放射自顯影和X射線微區分析；另一種是對樣品先采用戊二醛固定、冷凍保護劑浸泡等預處理，此法適用于細胞化學、免疫電鏡等超微形態學研究。

　　2.快速冷凍固定。冷凍超薄切片質量的好壞直接決定于快速冷凍效果。常用的快速冷凍方式有二：一是液氮直接冷凍；二是金屬接觸冷凍。后一種方法較好，即將銅塊先置于液氮中，待溫度平衡后，將樣品與銅塊接觸5～10秒鐘，以達到快速傳導降溫的目的，然后再將樣品置于液氮中待用。

　　3.切片。此步就用到關鍵器具——冷凍超薄切片機。該機是在固有型超薄切片機基礎上附加低溫操作裝置組成的。

　　4.染色。冷凍超薄切片可采用正染色或負染色。