怎樣用紫外分光光度法測蛋白質含量

1、280nm的光吸收法

用標準曲線法進行測定。標準蛋白質溶液配制的濃度為1.0 mg/mL。常用的標準蛋白質為牛血清清蛋白(BSA)。

2、280 nm和260 nm的吸收差法

核酸對紫外光有很強的吸收，在280 nm處的吸收比蛋白質強10倍(每克)，但核酸在260 nm處的吸收更強，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm處的消光系數是280 nm處的2倍；而蛋白質則相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。

3、215 nm與225 nm的吸收差法

蛋白質的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收測定時，可用215nm與225 nm吸收值之差，通過標準曲線法來測定蛋白質稀溶液的濃度。

4、肽鍵測定法

蛋白質溶液在238 nm處的光吸收的強弱，與肽鍵的多少成正比。因此可以用標準蛋白質溶液配制一系列50～500 mg/mL已知濃度的5.0 mL蛋白質溶液，測定238 nm的光吸收值A238，以A238為縱坐標，蛋白質含量為橫坐標，繪制出標準曲線。未知樣品的濃度即可由標準曲線求得。