急性中毒物質的快速篩選和檢測（五）

　　方法二(對—鄰試紙法)

　　1原理：氰離子與對—硝基苯甲醛能夠縮合為苯偶姻。在堿性條件下，苯偶姻使鄰二硝基苯還原，產生典型的紫色反應。

　　2試劑：

　　2.1對—鄰試紙：取1.5g對—硝基苯甲醛和1.7g鄰二硝基苯溶于100ml95%乙醇中，用普通定性濾紙浸泡5min后取出晾干，剪成條備用。

　　2.2醋酸鉛棉花：用10%醋酸鉛溶液將脫脂棉浸透后，壓除多余水份，100℃以下干燥備用。

　　2.3碳酸鈉飽和溶液：臨用時配制。取無水碳酸鈉試劑少許，用少量水溶解成飽和狀態溶液。

　　2.4酒石酸固體試劑

　　3檢測操作

　　操作方法與方法一相同，只是在檢氰玻璃管下方松軟地塞入醋酸鉛棉花。

　　實驗中，如果醋酸鉛棉花變為黑色，說明樣品中含有硫化物，應重新試驗加大醋酸鉛棉花的放入量，排除硫化氫的干擾。

　　本方法的靈敏度高于方法一，在10克樣品中。對┅鄰試紙對氰化物的檢出限為0.02mg，相當于2mg/kg。氰化物的含量越高，試紙顯色的時間越快，顏色越深，色澤保留的時間也越長。　　

　　APHO-E-06-2005食用油脂酸價和過氧化值快速檢測

　　評價食用油是否符合國家衛生標準，常用的理化指標是酸價和過氧化值。過氧化值超出衛生標準，說明這不是新鮮的油脂并已開始酸敗；酸價超出衛生標準，說明油脂正在并已經酸敗。但凡由酸敗油脂引起的食物中毒其酸價和過氧化值都會很高。

　　1.作用原理

　　利用食用油脂酸敗所產生的游離脂肪酸或食用油脂氧化所產生的過氧化物與試紙中的藥劑發生顯色反應，以此反應出油脂酸敗或油脂被氧化的程度。

　　2.實驗材料

　　速測卡：密封包裝，4℃～10℃干燥保存。使用的最佳環境溫度為25±5℃，環境濕度應在20%以上。從包裝中取出的試紙條應在10分鐘內使用，開封后的試紙條應在1個月內使用完。酸價紙片上如帶有紅色痕跡、過氧化值紙片上如帶有灰色痕跡，說明該紙片已被污染或已失效。

　　3.操作方法

　　植物油樣品，可直接取適量于清潔、干燥容器中，將含藥試紙端插入油樣中1～2秒，立即取出并開始計時。動物油樣品需加熱使其融化后測試。

　　酸價測試紙的反應計時時間為90±5秒。

　　過氧化值測試紙的反應計時時間視環境溫度而定，見下表。

　　當計時到達要求的反應時間，將試紙顏色與包裝盒上的比色板進行比較。

　　4.結果判定

　　酸價紙片的測試范圍在0～5.0 mg KOH/g，過氧化值的測試范圍在0～50meq/Kg。

　　顏色相同色塊下的標記數值即為樣品的檢測值。如試紙顏色在兩色塊之間，則取兩者的中間值。如中間值恰巧介于衛生標準規定值時，應慎重處理。

　　5.我國食用油脂酸價和過氧化值衛生標準

　　6.國際食品法典委員會規定的食用油脂酸價和過氧化值衛生標準

　　APHO-E-07-2005食用油中非食用油(桐油、大麻油、巴豆油、礦物油)的快速檢測

　　食用植物油中含有非食用油，一是容器混用，二是運輸中污染，三是人為加入等。非食用油一般都具有不同程度的毒性，食入后往往會引起中毒。食用植物油中非食用油的檢測是食品安全的重點項目。

　　1桐油

　　桐油是從桐樹果實中提出來的油，是一種快干性油，工業中用作油漆及涂料。桐油應用廣乏。其色、味與一般食用油相似，故常有誤食而中毒者

　　食用油中如摻有桐油，常采用三氯化銻法，亞硝酸法，及硫酸法進行檢驗。

　　方法一(三氯化銻法)GB/T5009.37-1996

　　操作：取油樣1ml于小試管中，沿管壁小心加入“桐油鑒別試劑A”1ml，使試管中溶液分為兩層，將試管置于40～50℃溫水中(溫度不宜過高)，加熱約10分鐘。如有桐油存在，在溶液分層的界面上，會出現紫紅色至深咖啡色的環，加熱時間延長，顏色會加深，更易觀察。

　　說明：本法對菜油，花生油，茶子油中混雜桐油很靈敏(可達0.5%)，但豆油，棉子油存在有干擾。

　　方法二(亞硝酸法，需自備硫酸和石油醚)

　　操作：取5～10滴油樣于試管中，加入2ml石油醚，使油溶解，加入3～4粒“桐油鑒別試劑B”，加入1ml硫酸(硫酸+水=1+1)，搖勻靜置，在5～15分鐘內觀察石油醚層(上層)，若呈現白色混濁即為陽性。放置后變黃色。

　　說明：本方法適用于豆油、棉子油、及深色油中混雜桐油的檢出，檢出限0.5%。本方法不適用于芝麻油。大量青油(梓油)存在，對本法有正干擾。

　　方法三(硫酸法，需自備硫酸)

　　取油樣數滴，置于白色點滴板凹穴中，加入1～2滴濃硫酸，如有桐油存在，則呈現深紅色并凝為固體，同時顏色逐漸加深，最后成為黑色凝塊。

　　2大麻油

　　大麻系一種有毒的大麻科植物，其果實含油在30%左右。大麻油呈棕褐色略帶淡綠色。由于大麻子中含有帶麻醉性的有毒成分，如四氫大麻酚，大麻二酚，大麻酚等，故食用未經處理或處理不當的大麻油，會引起中毒。可用以下4種方法檢驗大麻油。

　　方法一(鹽酸—蔗糖法，需自備鹽酸)

　　操作：取油樣1ml置試管中，加入濃鹽酸3～5ml，加入一次量的“大麻油鑒別試劑A”，振搖1分鐘后觀察，若酸層染上粉紅色，靜置后逐漸變成紅色，示有大麻油存在。芝麻香油對本方法有干擾。

　　方法二(磷酸法)

　　操作：取油樣1ml置于試管中，加入“大麻油鑒別試劑B”2ml，振搖混勻靜置5分鐘后觀察，酸層呈現綠色，示有大麻油存在。

　　方法三(對二甲胺基苯甲醛法)(僅提供方法)

　　操作：取油樣1ml置于試管中，加入1%對二甲胺基苯甲醛乙醚溶液lml，濃鹽酸lml，振搖混勻，靜置20分鐘后觀察，酸層呈現深綠色，示有大麻油存在。

　　方法四(薄層法)(詳見GB5009.37-2003)

　　3青油(梓油)

　　青油又稱梓油，柏子油，食用后會引起嘔吐和腹瀉。青油中含有較多的高級不飽和脂肪酸，能與溴生成不溶性的六溴化合物沉淀而被檢出。

　　操作：取油樣1ml置于試管中，加入無水乙醚1ml使其溶解。在溶液中緩緩滴人溴水，直至混合液呈鮮明紅色，搖勻后置冷水浴中(15℃以下)約15分鐘，取出觀察，如有沉淀生成，示有青油存在。

　　說明：本方法檢出限為2.5%，本方法對亞麻仁油，魚油有同樣反應。

　　4.蓖麻油

　　蓖麻油是一種工業和醫藥上的重要用油，不能食用，誤食后會引起腹瀉。蓖麻油能與無水乙醇以任何比例互相混合，而其它植物油不易溶于無水乙醇，故可以根據這一差別檢驗食油中混入蓖麻油。

　　操作：取油樣5ml，置于有0.1ml刻度的10ml離心管中，加入5ml無水乙醇液，密塞劇烈振搖2分鐘，去塞，將離心管置于離心機中，以l000轉/分鐘的速度，離心5分鐘。取出離心管，靜置30分鐘后，讀取離心管下部油層的體積數，如低于5ml，則表示油中摻有蓖麻油。

　　說明：①本方法檢出限為5%(油樣中含有5%以上的蓖麻油即可檢出)。②巴豆油也溶于無水乙醇，結果一樣，故還需用下法作巴豆油的檢驗。

　　5.巴豆油

　　巴豆油是一種劇毒的非食用油，把巴豆油與巴豆油鑒別試液混合后加熱，在兩液交界處會產生紅棕色的環，可作為鑒別巴豆油的項目之一。

　　操作：取一支試管，加入3ml“巴豆油鑒別試液”。另取一支試管，將1ml油樣注入其中，加入無水乙醇液5ml，充分混勻后，將此溶液沿試管壁慢慢加到盛有“巴豆油鑒別試液”的試管中，將此試管置40～50℃溫水中加熱30分鐘，如在兩液界面處出現棕色環，示有巴豆油存在。

　　注意：①本方法檢出限為2.5%。②棉子油，菜子油，豆油有時也會產生淡紅色環，但與巴豆油紅棕色環很容易區別。③因摻巴豆油的多少，色環的顏色由紅棕→棕黑色。④注意：“巴豆油鑒別試劑”為強堿溶液，一旦濺入眼內，要用大量清水沖洗。

　　6.礦物油

　　礦物油來源于石油分餾的產物，屬于較高級的直鏈烷烴，而食用油脂系高級脂肪酸的甘油酯，盡管外觀有某些相似，但其化學性質有很大的差別。

　　方法一

　　取1滴油樣于比色管中，加5滴“礦物油鑒別試劑(強堿溶液，謹慎操作)”和5ml無水乙醇，不加蓋，于80～100℃水中加熱(或將開水倒入燒杯中，將比色管放入水中)10分鐘，加熱過程中隨時輕輕搖動，取出時乙醇容量不要少于4ml，加入5ml蒸餾水或純凈水，若發生混濁為陽性，其濁度隨礦物油的濃度增加而加大。其最低檢出量為0.1%。如果油中混有硬度較大的水時，也會發生混濁，久放產生沉淀；混有礦物油時久放析出透明油滴浮于液面。操作中可用礦物油陰性樣品作對照試驗。

　　方法二(僅提供方法)

　　取根據礦物油在紫外光照射下能發生熒光，而植物油無此性質。據此可以檢驗出礦物油。

　　操作：取油樣及己摻有礦物油的對照油各1滴，分別滴于兩張白色濾紙片上，置紫外光下觀察.油樣與對照油樣出現青色熒光，則表示油樣中摻有礦物油。

　　方法三(需要蒸餾裝置)

　　作為食用油脂的高級脂肪酸的甘油酯，可以在堿性條件下發生水解反應(即皂化反應)，其產物皆易溶于水。而礦物油則不能皂化，也不溶于水。據此性質即可通過皂化反應來檢驗礦物油。

　　操作：把1ml油樣置于100ml的三角瓶里，加入1ml“礦物油鑒別試劑”和20ml無水乙醇。接上空氣冷凝管。將三角瓶置于沸水浴中。加熱回流5分鐘，皂化過程中，隨時振搖。皂化后，加入25ml沸水，混合均勻。溶液如呈渾濁，或有油狀物浮起，示有礦物油存在。　　 　　 APHO-E-08-2005瘦肉精(鹽酸克倫特羅)的快速檢測

　　本方法是一種檢測鹽酸克倫特羅(俗稱：瘦肉精)的快速篩選方法，適用于豬肉肝臟、肺臟、腎臟、瘦肉樣品的檢測。樣本滲出液的檢出限為3ng/ml。

　　1、檢測原理

　　樣本中的“瘦肉精”在流動的過程中與膠體金(或膠體硒)標記的特異性單克隆抗體結合，抑制了抗體和NC膜檢測線上“瘦肉精”-蛋白偶聯物的結合。如果樣本滲出液中“瘦肉精”含量大于3ng/ml，檢測線不顯顏色，結果為陽性。反之，檢測線顯紅色，結果為陰性。

　　2、試劑組成

　　“瘦肉精”快速檢測卡；展開液；一次性塑料吸管；一次性塑料手套；對照液。

　　3、標本收集

　　肉及內臟樣本(包括精肉、肝臟、肺臟和腎臟)立即檢測或收集在塑料袋中送檢。若不能及時檢測，樣本在2-8℃冷藏可保存24小時，-20℃冷凍保存1周，冷凍時忌反復凍融。

　　4、操作步驟以及結果判讀：

　　⑴測試前將未開封的檢測卡恢復至室溫。

　　⑵將瘦肉或內臟樣本剪碎，裝入1.5ml離心管中，蓋緊管蓋。放入沸水浴中加熱5分鐘以上使有液汁浸出，取出離心管放至室溫。

　　⑶從鋁箔袋中取出檢測卡(在一小時內使用)。

　　⑷將檢測卡平放于臺面，用塑料吸管垂直滴加1滴無氣泡的樣本滲出液(約20-30ul)于加樣孔，30秒后再加入展開液2-3滴(約60-80ul)。

　　⑸反應10min后，展開區出現紫色條帶為陰性結果，無條帶者為陽性結果。

　　5、注意事項：

　　⑴檢測卡在室溫下一次性使用。

　　⑵脂肪會導致假陽性結果，取樣時請棄去肉眼可見的脂肪部分。

　　⑶檢測時避免陽光直射。

　　⑷出現陽性結果，應用本卡復查并作陽性對照實驗。必要時送實驗室進一步定量。

　　⑸附帶的瘦肉精陽性對照液為5ng/ml。