【原理】
補體能使溶血素（抗綿羊紅細胞抗體）致敏的綿羊紅細胞（SRBC）發生溶血，當致敏的綿羊紅細胞濃度恒定時，溶血程度與補體含量和活性呈正比例關系。因此，將新鮮待檢血清做不同稀釋后，與致敏紅細胞反應，測定溶血程度，以50%溶血時的最小血清量判定終點，可測知補體總溶血活性。以50%溶血判斷結果比100%溶血靈敏、準確。
【材料】
1.待檢人血清：靜脈抽血，待凝后立即分離血清進行測定或-70℃保存。
2.緩沖鹽水（pH7.4）：取NaCl 75g，1mol/L HCl 177ml，三乙醇胺28ml，MgCl2·6H2O 1.0g，CaCl2·2H2O 0.2g。先將NaCl 溶于700 ml蒸餾水中，再加入HCl和三乙醇胺。將MgCl2·6H2O和CaCl2·2H2O分別 用2 ml蒸餾水溶解后，逐一加入，再用蒸餾水加至1000 ml，4℃保存。臨用前取上述溶液1份加9份蒸餾水，4℃保存待用。
3.2%SRBC懸液：新鮮脫纖維羊血或Alsever液保存羊血（4℃可保存3周）用生理鹽水洗2次，第三次用緩沖鹽水，2000rpm離心30min。取壓積紅細胞以緩沖鹽水配成2%懸液。為使濃度標準化，可將2%SRBC懸液用緩沖鹽水稀釋25倍，于分光光度計（542nm）測定透光率（以緩沖鹽水校正透光率至100%）。每次實驗用紅細胞濃度（透光率）必須一致。
4.生理鹽水
5.溶血素（anti-SRBC）：按說明書所標效價以緩沖鹽水稀釋至2單位。如效價為1：8000，使用時1：4000稀釋。
6.致敏SRBC：2%SRBC加等量2單位溶血素，混勻，置37℃水浴10min。
7.50%溶血標準管：取2%SRBC懸液0.5ml，加入蒸餾水4.5ml，混勻。
8.37℃水浴箱
9.離心機
10. 分光光度計
11. 試管、吸管
【方法】
1.取待檢人血清0.2ml，加入緩沖鹽水3.8ml，使成1：20稀釋。
2.按下表所示加入各試劑，混勻，將試管置于37℃水浴30min。
表 CH50法測定總補體活性操作
| 試管編號 | 1：20稀釋血清（ml） | 緩沖鹽水（ml） | 致敏SRBC（ml） | CH50（U/ml） |
| 1 | 0.10 | 1.40 | 1.0 | 200 |
2 | 0.15 | 1.34 | 1.0 | 133 |
| 3 | 0.20 | 1.30 | 1.0 | 100 |
| 4 | 0.25 | 1.25 | 1.0 | 80 |
| 5 | 0.30 | 1.20 | 1.0 | 66.6 |
| 6 | 0.35 | 1.15 | 1.0 | 57.1 |
| 7 | 0.40 | 1.10 | 1.0 | 50 |
| 8 | 0.45 | 1.05 | 1.0 | 44.4 |
| 9 | 0.50 | 1.00 | 1.0 | 40 |
| 10 | 一 | 1.50 | 1.0 | 一 |
【結果】
將各試管2500rpm離心5min，取上清液與50%溶血標準管目視比較，觀察溶血程度。取與50%溶血標準管相接近的兩管在分光光度計上分別讀取光密度值A542nm （0.5cm比色杯，以緩沖鹽水作為空白調零），以最接近50%溶血標準管的一管，按下列公式計算CH50活性。
本法測定的正常值范圍為50-100 U/ml。
【討論】
1.操作注意事項
（1）待檢血清標本應無溶血、無乳糜、無污染。
（2） 緩沖液、致敏SRBC均應新鮮配制，緩沖液若被細菌污染，會導致自發溶血。
（3）待檢血清標本必須新鮮，如室溫放置2h以上，會使補體活性下降。
（4） 實驗所用玻璃器皿，一定要清潔，酸堿均能影響測定的準確性。
（5） 測定需在0℃-4℃進行，試管需預冷，可保持補體活性。
（6） 補體的溶血活性與反應時緩沖液的pH、離子強度、鈣鎂離子量、羊紅細胞量、反應總體積及反應溫度均有一定關系，因此實驗時需對反應的各個環節做嚴格控制。
2.方法學評價
（1）本法簡便快速，但敏感性較低，不能測定補體蛋白的絕對值。
（2）總補體活性的測定主要反映補體C1~C9通過經典途徑活化的程度。
3.臨床意義
（1） 在急性炎癥、感染、組織損傷（如風濕熱急性期、結節性動脈周圍炎、皮肌炎、傷寒、Reiter綜合征和多發性結節炎）、癌腫、骨髓瘤等時，常可見補體含量增高。
（2） 低補體血癥多見于急性腎小球腎炎、膜增殖性腎小球腎炎、SLE活動期、RA、亞急性細菌性心內膜炎、急性乙型病毒性肝炎、遺傳性血管神經性水腫等。