1. 準備好超凈臺，將試劑及材料放于超凈臺上準備開始實驗。
2. 仔細檢査培養物有無污染或衰退跡象。這一步驟對于懸浮培養物來說比單層貼壁細胞更難，細胞狀態不好時表現為皺縮，外形不規則和（或）顆粒化。
健康的細胞干凈而透明，在相差顯微鏡下核清晰可見，而且靜置培養時常常可見小細胞團。
3. 將培養物（起始培養物：HL60、L1210或 P388 ， 以 2×104 ml 接種在 25 cm2 培養瓶中7 天和14天）放至無菌工作區域，從中取樣，細胞計數。
4. 根據上文所述的懸浮培養物傳代標準及對該培養物行為特征的了解決定是否傳代。若需傳代，如下進行：
5. 混勻細胞懸液，通過上下吹打使小細胞團分散。
6. 加 50 ml 培養基（生長培養基，如 MEM 含 Spinner 鹽（S-MEM ) 或 RPMI 1640，加 23 mmol/L NaHCO3，5 % 小牛血清
）至 2 個新攪拌培養瓶。
7. 在 4 個 25 cm2 瓶中各加 5 ml 培養基。
8. 向各瓶中加人足量細胞。對于生長緩慢的細胞（倍增時間 36.48 h ) 終濃度達到 1×105 /ml ，對于快速生長的細胞（倍增時間 12~24 h ) 終濃度達到 2×104/ml。對于"材料" 中提到的細胞終濃度達到 1×104 ml 。
9. 用 5 % CO2 向瓶中吹人氣體。
10. 蓋上培養瓶，放置于孵箱。向單層細胞一樣，培養瓶平放。
11. 蓋好攪拌瓶，在培養箱或 37°C 溫室中，放在磁力攪拌器上，以 60~100 rpm 的轉速旋轉。注意攪拌馬達不要使培養物過度升溫。若必要可在瓶底部加放聚苯乙烯泡沫墊子。電磁感應的攪拌器產熱低且無可移動部件。
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