無論臨床還是科研（相對來說科研上可能用得更多），為了使不同儀器、不同條件、不同時間檢測的熒光強度具有可比性，眾多FLOWER煞費苦心。很多人想到了用空白或同型對照調整陰性細胞群位置，但不知道你們有沒有想到用標準熒光定量微球？
熒光定量微球是指一系列在微球表面標記了特定數量熒光分子的微球，因為微球表面的熒光分子數量已知，即等量可溶性熒光素分子（MESF）已知，所以將儀器檢測得到的熒光值（arbitrary units， a.u.）作相關性分析，即可擬合得到標準曲線及其對應的公式。
有了這條標準曲線，用標本檢測得到的熒光值（a.u.）代入曲線擬合公式中，就能計算出MESF值，只要每次這個值，不會因為儀器、電壓條件、時間而變化，那么你每次檢測的結果，就具備了高度的可比性。
不過我個人覺得，在臨床上用得可能不多，除非一些需要進行精準定量的抗原表達監測，而科研上可能會用處更大，例如監測轉染后的GFP、轉錄因子等蛋白表達量的變化，用絕對定量的MESF，你就不用擔心儀器不同、電壓變動對你結果的影響。
聊到這里，有些FLOWER可能會說，我老早就知道這方法了。確實，這個方法不是新方法，是老生常談，但可能會對一些新入門的FLOWER會有啟示，故今天重提。此外，更重要的是，今天談到這個主要是看到這篇文章《FlowCal: A user-friendly, open source software tool for automatically converting flow cytometry data from arbitrary to calibrated units》，文章發表于2016年4月份，里面介紹了他們原創的Python腳本：FlowCal，這個Python軟件包可以根據你的熒光定量微球和實驗數據，自動進行曲線擬合和MESF值的自動計算。