體外連接的DNA重組分子導入合適的受體細胞才能大量增殖。為了提高受體菌攝取外源DNA的能力，提高轉化效率以獲得更多的轉化子，人們摸索出了不同的方法處理細菌，使其處于感受態。目前主要采用電轉化法和CaCl2法將外源DNA導入受體細胞中，并需要相應地制備電轉化感受態細胞和CaCl2感受態細胞。
實驗目的：學習感受態細胞的制備過程
實驗材料：大腸桿菌菌株DH5a或DH10B
實驗原理：電轉化法是利用瞬間高壓在細胞上打孔，因而需用冰冷的超純水多次洗滌處于對數生長前期的細胞，以使細胞懸浮液中應含有盡量少的導電離子。轉化效率為109～1010 轉化子/μg DNA；
對于熱激法，是利用冰冷的CaCl2處理對數生長期的細胞，可以誘導其產生短暫的“感受態”，易于攝取外源DNA。轉化效率為106 ～107轉化子/μg DNA。
CaCl2感受態細胞的制備實驗步驟
1．前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過夜（約16小時）；
2．取1ml過夜培養物轉接于100ml LB培養基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養約2.5-3小時（250-300rpm）；
3．將0.1M CaCl2溶液置于冰上預冷；以下步驟需在超凈工作臺和冰上操作
4．吸取1.5ml培養好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；
5．4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；
6．棄去上清，加入100ml預冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動打勻，使細胞重新懸浮，在冰放置20分鐘；
7．4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；
8．棄去上清，加入100ml預冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動打勻，使細胞重新懸浮；
9．細胞懸浮液可立即用于轉化實驗或添加冷凍保護劑（15% - 20%甘油）后超低溫冷凍貯存備用（－70℃）。
電轉化法制備大腸桿菌感受態細胞的實驗步驟
1.前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過夜；
2.取2ml過夜培養物轉接于200ml LB培養基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養至OD600＝0.6（約2.5-3小時）；
3.將菌液迅速置于冰上。以下步驟務必在超凈工作臺和冰上操作
4.吸取1.5ml培養好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；
5.4℃下3000g冷凍離心5分鐘；
附注：
影響感受態細胞轉化效率的因素及實際操作過程中應注意的事項：
1)細菌的生長狀態：實驗中應密切注視細菌的生長狀態和密度，盡量使用對數生長期的細胞（一般通過檢測OD600來控制。DH5a菌株OD600為0.5時細胞密度是5×107/ml）；
2)所有操作均應在無菌條件和冰上進行；
3)經CaCl2處理的細胞，在低溫條件下，一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加，24小時達到最高，之后轉化率再下降（這是由于總的活菌數隨時間延長而減少造成的）；
4)化合物及無機離子的影響：在Ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或還原劑等物質處理細菌，可使轉化效率大大提高（100-1000倍）；
5)所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率；
6)質粒的大小及構型的影響：用于轉化的應主要是超螺旋的DNA；
7)一定范圍內，轉化效率與外源DNA的濃度呈正比；