1、在2×105/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒,充分混勻。37℃孵育。或者150g室溫離心4小時(選作,部分難轉染的細胞系采用此步驟可以提高轉染效率)。
2、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時后(或離心結束后)加入等體積新鮮培養基以稀釋polybrene。
3、繼續培養3-4天。中間視細胞生長情況可傳代或換液。
一定要注意的幾點:
1、感染時的培養基盡量少些；
2、每1ml的培養基中加入5-10ul的Polybrene(儲存液濃度為2mg/ml ),可以提高效率約3-5倍。不過病毒感染效率的問題都是相對的,達到自己的研究目的即可。