戴安液相色譜法分析煙草中綠原酸和蘆丁含量

煙草中含有多種多酚類化合物，為煙草產生香味的主要 前體物，其種類和含量隨物種和地域分布存在密切關系， 其中綠原酸和蘆丁占有主要部分 [1]。現代藥理學研究表明 綠原酸、蘆丁等多酚類化合物具有抗氧化作用，可降低 血管脆性，增加細胞膜滲透性能，提高細胞排泄生理體 液等功能，已廣泛用于醫藥、食品等行業 [2,3]。煙草中多 酚類化合物的檢測方法有分光光度法、氣相色譜法、液 相色譜法等。其中分光光度法專屬性差且只能測定其近 似總量；氣相色譜法則需要將樣品進行衍生后才能分析； 傳統液相色譜法需要用有機溶劑進行脫脂處理，樣品處 理較繁瑣 [4]

本研究對煙草中 2 種多酚化合物提取方法進 行了優化設計，并采用反相液相色譜方法測定煙草中綠 原酸和蘆丁含量。其分析結果與發表相關標準的方法 [5] 相比，該方法靈敏度高、檢出限低、峰形對稱、分析時 間短。

儀器配置 Thermo Ultimate 3000 系統： 泵：LPG-3400 自動進樣器：WPS-3000 柱溫箱：TCC-3000 檢測器：DAD-3000 色譜軟件：Chromeleon 6.8

測試條件 色譜柱：Acclaim 120? C18, 4.6×150mm, 5μm, PN:059148， SN:003887 流動相：A：0.1% 磷酸溶液，B：甲醇 梯度程序：0~10min: 20% → 30%;10~25min:30% → 90%B; 25~27min:90%B;27~28min:90% → 20%B;28~32min: 20%B

進樣量：10μl 柱溫：35℃ 檢測波長：325nm 樣品處理 精密稱取 0.5g 樣品粉末置于 50ml 量瓶中，加入 55% 甲醇 20ml，超聲提取 30min，放置室溫，過濾，取 2ml 濾液用 20% 甲醇稀釋至 10ml，搖勻備用。

結果與討論

提取條件篩選 通過查閱文獻[6~8]，對提取溶劑濃度和用量進行了考察 (表1) 表 1. 提取實驗方案 序號 甲醇濃度 (%) 體積 (ml) 1 30 10 2 30 20 3 30 30 4 50 10 5 50 20 6 50 30 7 70 10 8 70 20 9 70 30 結果顯示，當甲醇濃度為 50% 時，兩種成分的含量達到值，增加甲醇濃度時，綠原酸含量不再增加，蘆丁 含量會有降低趨勢。當溶劑體積為 20ml 時，兩種成分含 量達到值，再增大溶劑用量，二者含量不再增加。 通過數據分析 ( 見圖 1)，決定采用 55% 甲醇 20ml 程度提取煙草中的綠原酸和蘆丁兩種成分。