戴安P680型高效液相色譜儀（含自動進樣器）操作規程

1 按下穩壓電源工作電源開關鍵至“ON”狀態。依次接通P680型輸液泵、ASI-100自動進樣器、柱溫箱、檢測器、電腦。

2 更換蠕動泵清洗瓶中5%的甲醇(如果儀器經常使用則建議每周更換兩次，如果儀器很少使用則每次使用前必須更換。)

3 確認洗針瓶中的洗液是否太少，若太少，則需補充或更換。洗液一般為：50%的甲醇。

4 排泵內氣泡

4.1 擰松泵右側的快速清洗閥（反時針兩圈左右）。按下泵前面板右下方的“Purge”鍵，排泵內氣泡，儀器將以6.0ml/min的速度自動快速清洗泵內殘留的氣泡，5分鐘將自動停止。若想手動停止，則再按“Purge”鍵，將停止清洗。

4.2 將每個需要使用的通道分別排完氣泡后，擰緊快速清洗閥（順時針擰緊，注意不要擰得過緊）。

5 系統聯機

5.1 檢查確認密碼鑰匙已與計算機聯結，鼠標左鍵雙擊桌面下方工具欄的“Chromeleon”圖標，打開 [Chromeleon Server Monitor]，點擊[Start]，待變色龍圖標變成灰色，并顯示“Chromeleon Server is running idle”時，關閉[Server Monitor]。

5.2 鼠標左鍵雙擊桌面的“Chromeleon”圖標。雙擊右邊方框中的“HPLC-Graphics.pan”，點擊泵模塊下的“Settings”鍵，將跳出泵的設定窗口，設置完成后，按右下方的“Close”關閉該界面。點擊自動進樣器模塊下的“Settings”鍵，將跳出進樣器的設定窗口，設置完成后，按右下方的“Close”關閉該界面。點擊檢測器模塊下的“Settings”鍵，將跳出一個泵檢測器的設置窗口，設置完成后，按右下方的“Close”關鍵該畫面。

6 序列進樣

6.1 新建一個程序文件

6.1.1 依次點擊File/New，選中“Program File”后,進入程序編輯向導界面。

6.1.2 確認泵的工作方式（“Isocratic”等度分析、“Ramp”二元梯度分析、“Multi-Step Gradient”多元梯度分析）、合適的流動相通道及高/低壓極限和流速。

6.1.3 自動進樣器的參數設置，每一個參數后面都有一個推薦值，一般不做改動。

6.1.4 通道的選擇，設定采集一個樣時需要采集的時間段（Acquisition Time），也可以不從0分鐘開始采集，也就是前面一段時間不采集信號。

6.1.5 紫外信號的具體設置，設定檢測波長，波長帶寬，參比波長，參比波長帶寬。一般設定帶寬為1nm，設定參比波長為600 nm，參比波長的帶寬為1nm。

6.1.6 設定完成后瀏覽程序參數，編輯、修改不適合處，最后單擊工具欄中的“保存”按鈕，給新建的這個程序起一個名字，若要新建一個文件夾，可點右上方的新建文件夾，然后將這個程序文件放入其中。

6.2 建立方法文件

6.2.1 依次點擊File/New，選中“Method File”后，進入方法編輯向導界面。方法文件是在進完樣后采集到譜圖進行處理數據時需要用到的，所以現在不需要做任何改動。不能夠等譜圖出來之后再去建方法文件。最好將它和剛才建的程序文件放在同一個文件夾里。

6.3建立新序列文件

6.3.1 依次點擊File/New，選中建序列文件“Sequence （using Wizard）”，后進入序列編輯向導界面。

6.3.2 設定樣品信息

6.3.2.1 設定樣品名稱，如果待測樣品溶液名字一樣，只是序號是按順序遞加的，可以在方框的空白處輸入待測樣品溶液名，并通過右邊的三角箭頭使用“sample Number”，讓軟件自動加上一個序號。“Number of ”為待測樣品溶液的個數。“Injection per”為每個待測樣品溶液需要進樣的次數。

“Start”為第一個待測樣品溶液放在自動進樣器上的位置，如果所測的待測樣品溶液是按順序放在自動進樣器上的，則輸入第一個待測樣品溶液的位置，軟件會自動輸入以下各個待測樣品溶液的位置。“Injection”為進樣體積。

6.3.2.2 設定好后，按左下方的“Apply”后，可將待測樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來。

6.3.3 設定對照品信息

6.3.3.1 同設定樣品信息。但有時候由于待測樣品太多，花的時候較長，為了防止保留時間漂移，峰面積有變化，消除系統的誤差等原因，需要采用間隔進樣的方式進樣。“Variatio standards after each unknown”意思為每進幾個標準溶液后進幾個待測溶液，再進個標準溶液后進幾個待測樣品溶液。

6.3.3.2 設定好后，按左下方的“Apply”后，可將所有樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來，且標準溶液在前，待測樣品溶液在后。

6.4 點擊圖標進入瀏覽器“Browse”界面，找到編輯好的序列。在此界面可以對序列進行進一步的調整，增加或減少樣品；改變樣品名、樣品類型、進樣位置、進樣量、分析程序、積分方法等參數，修改后保存序列。

6.5 序列進樣

6.5.1 如果正在采集基線，則點工具欄中藍色小圓點，停止采集基線，將跳出如下窗口：提示您是否保存剛才正在采集的基線譜圖。如果要保存，則在“Save to sequence”前“√”后選擇一個保存路徑。通常是不保存的，則按右上方的“YES”鍵停止基線的采集。

6.5.2 加入進樣序列：擊工具欄上“Start /stop Batch”（開始/停止批進樣）鍵，將跳出一個窗口，如果方框中有不需要做的序列（如果有，一般為上次未做完的序列），則選中后，點右邊的“Remove”鍵，將其移走。點右上方的“Add…”將需要進樣的序列加入列表中。點擊底下右方的“Ready Check”，檢查設置好的程序、方法、序列有沒有錯誤或儀器有沒有準備好。如果顯示有紅色感嘆號圖標，則說明有錯誤。下圖顯示的信息為需要占有多大電腦空間和需要用掉多少流動相，沒有其它錯誤信息。單擊“ok”，完成檢查。

6.5.3 開始進樣：單擊“Start”，儀器將會自動根據軟件中設定的先后順序開始進樣，直至所有的樣品全部進樣。若軟件中相應的位置上并沒有放置樣品瓶，儀器將會自動識別，并跳過該樣品進下一個樣品。當第一個樣品進完后，將會等待第二個樣品進樣，這時候保留時間（Retention Time）顯示為0.00min。

7 處理數據

7.1 點擊控制面板上的“Browser”進入需要處理數據的序列。

7.2 選擇定量方法點擊方法文件“測試方法.qnt”。

7.2.1 基本設置“Genernal”含量的單位后面輸入最后的計算出來的量的單位，液相樣品一般為濃度單位，固體一般要算百分含量。

7.2.2 積分參數設定“Detection”“Minimum Area：”設定最小峰面積，一般設置0.01～10之間。低于設定值的將不會積分；“Valley To Valley On：”設置從峰谷到峰的積分；“Inhibit Integration On：”設定不積分段從什么時候開始不積分，“Inhibit Integration Off：”設定不積分段從什么時候結束不積分（ON和OFF是成對使用的。）；“Fronting sensitivity Factory：” 前沿峰靈敏度因子，一般設為2～4為宜；“Tailing sensitivity Factory：”拖尾峰靈敏度因子，一般設為2～4為宜；“Rider Threshold：”肩峰值。設定為100%，兩分不開的峰垂直分開單獨積分。

7.2.3 峰表（Peak Table）設置：在第一列中輸入標樣的名字；在第二列在輸入相對應的保留時間；在第三列中輸入一個正負范圍，一般在設置值≤保留時間的5%；第四列為定量標準，一般為外標法（External）；第五列為定量類型，一般以面積來定量（Area）；第六列為校正類型：

a) 單點校正一般做樣都是單點校正，所以選第一項：過原點的直線（Linear），

b) 線性校正如果要做線性的話，就要選第二項：帶截距的直線（Linear with Offset）。

其它設置都不用改動。

7.2.4 定量表（Amount Table）

7.2.4.1 編輯列“Edit Amount Column”在表格的下方任何一位置點右鍵，選中“Edit Amount Column”，在“Assign standards on the”后面的下拉菜單中選擇“Name”，右邊框中將會顯示有幾個標樣。點擊左邊方框下的自動生成列“Auto Generate”

a) 做線性的話就選擇第一項（..separate..），表明要生成五個不同的列。

b) 做單標定量的話選擇第二項（..single..），表明生成一個列。

在“Amount”列中輸入標樣的濃度。

7.2.5校正（Calibration）如果有一點誤差較大（偏離直線較遠），不想讓它參與校正。比如說第一個點不想要，則將對應的“√”去掉，按確定即可。

7.2.6 保存剛才方法的更改。