手把手教你安裝毛細管柱（二）

  步驟 6：進行氣體檢漏

　　在色譜柱加熱前，一定要對GC系統進行檢漏。當我們對進樣口和檢測器進行載氣檢漏時，使用電子檢漏計是最為有效的方法之一。建議不要使用Snoop等肥皂泡，它有可能由被檢測處進入色譜柱和其它裝置中，從而對系統有所損害。而且不能使用Snoop對正在加熱的進樣口和檢測器裝置進行檢漏。如果一定要用液體檢漏，建議使用50/50的異丙醇/水的混合溶液。

　　步驟 7：確定載氣流量，再對色譜柱的安裝進行檢查

　　警告：如果不通入載氣就對色譜柱進行加熱操作，就會快速并且永久性地損壞色譜柱。當色譜柱安裝好后，再依照步驟4對載氣流量進行確認，或者使用非保留化合物樣品進行檢測，我們可以通過分析得到的樣品譜圖來確認進樣口和檢測器的安裝是否正確。表3中列出了常用的非保留化合物樣品。

　　實驗過程：如果使用分流/不分流進樣口，將色譜柱的溫度保持在35-40℃，使用分流模式進樣1-2mL樣品。如果使用的是不分流大口徑進樣口，由于樣品不被分流進樣，進樣前應先對樣品進行稀釋，以免得到飽和的平頭峰形。這樣，我們應該得到一張峰形尖銳的譜圖，而使用不分流大口徑進樣口，色譜峰可能會有輕微拖尾。如果得不到色譜圖，有可能是根本就沒有載氣通過系統。那就需檢查一下調節器、氣體附件和流量控制器的設置是否正確。當然也可以是檢測器、記錄儀和注射針等出了問題。如果色譜峰有明顯的拖尾現象，可能是進樣口有泄露，或是色譜柱安裝不完整，也有可能是分流比設 置得太低等。我們需要重新對色譜柱進行安裝并對進樣口進行檢漏。只有完全解決了這個問題，才能進行下一步。

　　注意：

　　1.對于PLOT柱，以上大多數化合物都有明顯地保留吸附

　　2 .不要直接液體進樣;建議使用頂空進樣裝置

　　3 .當溫度小于100℃時，乙腈在大多數的色譜中都有保留。使用時需將色譜柱的溫度提高到

　　步驟 8：色譜柱的老化

　　色譜柱安裝和系統檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進行老化了。對色譜柱升至一恒定溫度，通常為其溫度上限。特殊情況下，可加熱至高于最高操作溫度10-20℃左右。但是一定不能超過色譜柱的溫度上限，那樣機易損壞色譜柱。升溫速度一定要快，不要將程序升溫的速度設定的太慢。當達到老化溫度后，記錄并觀察基線。比例放大基線，以便容易觀察。初始階段，基線應持續上升，在到達老化溫度后5-10min開始下降，并且會持續30-90min。當達到一個固定的值后，基線就會穩定下來。如果在2-3小時后基線仍無法穩定或在15-20分鐘后仍無明顯的下降趨勢，那么有可能系統裝置有泄露或污染。遇到這樣的情況，應立即將柱溫降至40℃ 以下，盡快地檢查系統并解決相關的問題。如果還是繼續地老化，不僅對色譜柱有損害，而且始終得不到正常穩定的基線。另外，老化的時間也不宜過長，不然會降 低色譜柱的使用壽命。一般來說，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時間較長，而弱極性固定相和較薄涂層的色譜柱所需時間較短。而PLOT色譜柱的老化方法又各不相同，具體步驟請參閱歲柱子的操作說明書。如果在色譜柱沒有與檢測器連接就進行老化，那么老化后，色譜柱末端部分可能已被破壞。要先把柱末端10-20cm部分截去，再將色譜柱連接到檢測器上。

　　溫度限定是指色譜柱能夠正常使用的應用溫度范圍。如果操作溫度低于色譜柱的溫度下限，那么分離效果和峰形都不會很理想。但這樣對色譜柱本身并無什么損害。

　　溫度上限通常有兩個數值。數值較低的是恒溫極限。在此溫度下，色譜柱可以正常使用，且無具體的持續時間限制。較高的數值是持續升溫的升溫極限。該溫度的持續時間同產干部多于十分鐘。高于溫度上限的操作則會降低色譜柱的使用壽命。

　　步驟 9：設置確認載氣流速

　　對于毛細管色譜柱，載氣的種類首選高純度氦氣或氫氣。建議不要使用氮氣做載氣。載氣的純度最好大于99.995%，而其中的氧氣含量越少越好。通常載氣級或超高純度氦氣和氫氣中氧氣的含量小于2ppm。如果您使用的是毛細管色譜柱，那么依照載氣的平均線速度(載氣流動的速度cm/sec)而不是利用載氣流速(載氣流量mL/min)來對載氣作出評價，這樣不僅簡單而且非常方便。因為柱效的計算采用的是載氣的平均線速度，而不是體積流速。

　　我們進一針非保留樣品(見表3)，確定它的保留時間。

　　表3 常用的非保留化合物樣品

　　然后按下列公式計算平均線速度(V)：

　　不要使用色譜儀上的流量計去設置載氣流速，可能不準。大多數情況下，采用流速范圍的中間值較為適合。載氣速度(流速)會隨著柱溫的改變而改變，請在溫度恒定的情況下測量其具體數值。

　　步驟 10：柱流失檢測

　　在色譜柱老化過程結束后，利用程序升溫做一次空白試驗(不進樣)。一般是以10℃/min從50℃升至恒溫極限，達到恒溫極限后保持10min。這樣我們就可以得到一張流失圖。我們可以看出到一定程度，基線會快速地上升。使用記錄裝置將基線記錄下來，并記錄下50℃ 和恒溫極限時的信號值。這些數值可能對今后做對比試驗和實驗問題的解決有幫助。在空白試驗的色譜圖中，不應該有色譜峰出現。如果出現了色譜峰，通常可能是 從進樣口部位來的污染物。如果在正常的使用狀態下，色譜柱的性能開始下降，基線的信號值將會增高。另外，如果在很低的溫度下，基線信號值明顯大于初始值 (與最初使用得到的結果比較)，那么最有可能的是色譜柱和GC系統有污染。

　　步驟 11：分析實驗混合測試樣品

　　最后，我們利用對混合測試樣品的分析來確認色譜柱的安裝和性能。建議使用我們提供的對色譜柱質量檢定所提供的標準樣品。有時，對于一些比較特殊的分析，我們 采用適合于鑒定系統性能的樣品進行分析。每一根新色譜柱都帶有一張柱性能測試譜圖，在相同于圖中實驗條件和測試樣品的情況下，我們應該得到與標準測試相同或相近的譜圖。如果試驗的重復性很差，有可能是色譜柱的安裝、實驗的操作或儀器本身出現了問題。那么在正式做其他樣品之前，要解決掉所有出現的問題。