血清中有免疫復合物存在時，可與其本身的C1（內源性C1）結合。將被檢血清56℃加熱1h，能破壞結合的C1，空出補體結合位點。當加入豚鼠血清（外源性C1）及指示系統（致敏SRBC）時，CIC又可與外源性C1結合，使致敏SRBC的溶血被抑制。
1、試劑
（1）緩沖生理鹽水 NaCl l7.00g，NaaHP04 1.13g，KH2P04 0.27g，蒸餾水溶解至100ml。用時取此液5mL，加蒸餾水95ml，10%硫酸鎂0.1ml當日使用；
（2）溶血素 按效價以緩沖鹽水稀釋至2單位；
（3）2%SRBC新鮮脫纖維羊血或Alsever液保存的羊血（4℃可保存3周）
用生理鹽水洗2次，第三次用緩沖鹽水，2500r/min離心lOmin，取壓積紅細胞用緩沖鹽水配成2%懸液。為使SRBC濃度標準化，可將2%懸液用緩沖鹽水稀釋25倍，于分光光度計（542nm）測定其透光率（以緩沖鹽水校正透光率至100%）。每次實驗所用SRBC濃度（透光率）必須一致，否則應予調整；
（4）致敏SRBC 2%SRBC懸液加等量1：1000溶血素，混勻，37℃水浴10rain；
（5）豚鼠血清 取3只成年健康豚鼠血清混合分裝，每管0.5ml，-30℃保存。用時取出一管，以緩沖鹽水作1：100稀釋；
（6）熱聚合人IgG
將人IgC（10mg/mL）置63℃水浴加熱15rain，立即置冰浴內，冷卻后過Sepharose4B柱或SephacrylS-300柱，收集第一蛋白峰。所獲熱聚合人IgG可用考馬斯亮藍法測定蛋白含量。也可取人IgG（10mg/mL）10mL，攪拌下滴加1.8%戊二醛100uL，24h后加入0.4mol/LpH5.4，Tris-HCl緩沖液100uL終止反應，過Sepharose
4B或Sephacryl
S-300柱，用0.01mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫，收集第一蛋白峰。加入牛血清白蛋白至0.5%，分裝后-40℃保存。試驗中可用作陽性對照和制備標準曲線；
（7）50%溶血標準管 致敏SRBC0.4ml加0.6mL蒸餾水使完全溶血后，取0.5ml加緩沖鹽水0.5ml
2、操作步驟
（1）將被檢血清置56℃水浴1h；
（2）設兩排管徑、色澤相同的試管（試驗排與對照排），每排5支；
（3）加豚鼠血清與緩沖鹽水至各管；
（4）試驗管每管加被檢血清0.1ml，對照各管不加血清，用緩沖鹽水0.1ml代替。37℃水浴10rain；
（5）各管加致敏SRBC0.4ml，混勻，置37℃水浴30rain；
（6）將各管1000r/rain離心3min，或置4℃待SRBC自然下沉后觀察結果。以上清液與50%溶血管比色。
3、結果判斷
以50%溶血管作為判定終點。凡試驗排比對照排溶血活性低1管或1管以上者，抗補體試驗陽性，提示有免疫復合物存在。每次實驗可用熱聚合人IgC作陽性對照。
4、注意事項
（1）此方法敏感性較高，可測出每毫升IC的限度為微克（Pg），甚至納克（ng）水平。其缺點是任何水平上千擾補體反應序列的物質都能引起假陽性結果。補體旁路途徑的激活劑（如天然多糖、細菌內毒素等）將產生明顯的抗補體活性，血清經過56℃加熱，可能會改變某些IC的結構。因此，有人認為單獨抗補體實驗陽性，尚不足以證實IC的存在。
（2）混合豚鼠血清一般1：100稀釋后應用。-30℃保存2周后或在夏季取血，豚鼠補體活性會有所下降。使用前可先滴定，選取0.1mL可引起 50%溶血的補體稀釋度。
（3）豚鼠血清切忌反復凍融，已融化未用完者宜棄去。
（4）緩沖鹽水、2%SRBC懸液、致敏SRBC均應新鮮配制。
（5）被檢血清應新鮮，無細菌污染及溶血。如當日不檢測應置-30℃凍存。檢測前置56℃水浴1h滅活，應嚴格控制加溫溫度與時間。
（6）本法只能檢出與補體結合的CIC，抗補體的任何因素均能干擾本實驗。