按大小分離RNA：在含有甲醛瓊脂糖凝膠上進行RNA的電泳

RNA 樣品RNA 大小標準參照物

溴化乙錠甲醛甲酰胺甲醛凝膠電泳加樣緩沖液MOPS 電泳緩沖液

瓊脂搪凝膠水平電泳儀透明直尺水浴

一、材料

1. 緩沖液與溶液

溴化乙錠（200 μg/ml)

甲醛

甲酰胺

10X 甲醛凝膠電泳加樣緩沖液

10X MOPS 電泳緩沖液

2. 凝膠

含有 2.2 mol/L 甲醛的瓊脂搪凝膠

3. 核酸和寡核苷酸

RNA 樣品

RNA 大小參照物

4. 專用設備

水平電泳儀

透明直尺

55℃ 水浴

二、方法

1. 在一滅菌的微量離心管建立變性反應

RNA（多達 20 μg）          2.0 μl

10X MOPS 電泳緩沖液     2.0 μl

甲醛                                4.0 μl

甲酰胺                            10.0 μl

溴化乙錠（200 μg/ml）    1.0 μl

2. 蓋緊微量離心管的蓋子，于 55℃ 溫育 RNA 液體 60 min，在冰水中冷卻樣品 10 min，然后離心 5s 并將所有的液體在微量離心管的底部沉淀。

3. 加 2 μl 10X 甲醛凝膠加樣緩沖液并將試管重新置于冰上。

4. 將瓊脂糖/甲醛凝膠裝入水平電泳槽中，加入足夠 1X MOPS 電泳緩沖液覆蓋凝膠約 1 mm。電泳 5 min ( 5 V/cm)。加 RNA 樣品到凝膠加樣孔中，將空膠兩側的兩條最外側的泳道留下，加樣 RNA 標準大小參照物。

5. 凝膠浸入 1X MOPS 電泳緩沖液中，4~5 V/cm 電壓下進行電泳，直到溴酚藍移出約 8 cm ( 4~5 h)。電泳時用較高電壓會導致條帶模糊不清。因為電泳緩沖液的 pH 值在電泳過程中會發生變化，裝好電泳槽，緩沖液通過蠕動泵不斷從一個室到另一個室。每隔一個小時更換一次緩沖液。

6. 將凝膠放置于一片 Saran 膜上在紫外線透射儀上觀察 RNA 將染色凝膠和紫外線透射的照片用透明的直尺對比。

7. 照像并測量照片上每個 RNA 條帶至加樣孔的距離，以 RNA 片段大小的對數值對 RNA 條帶的適移距離作圖，用所得曲線計算從凝膠轉移到固相支持體后通過雜交計算出 RNA 分子的大小。

8. 通過上或下毛細管轉移固相化的 RNA 到固相支持物上。