4-氨基安替比林-三氯甲烷萃取光度法
方法提要
被蒸餾出的揮發酚類在pH10.0±0.2和以鐵氰化鉀為氧化劑的溶液中，與4-氨基安替比林反應形成有色的安替比林染料。此染料的最大吸收波長在510nm處，顏色在30min內穩定，用三氯甲烷萃取，可穩定4h并能提高靈敏度，但最大吸收波長移至460nm。
本方法不能區別不同類型的酚，而在每份試樣中各種酚類化合物的組成是不確定的。因此，不能提供含有混合酚的通用標準參考物，本方法用苯酚作為參比標準。
方法適用于海水及工業排污口水體中低于10mg/L酚含量的測定。酚含量超過此值，可用溴化滴定法。檢出限為1.1μg/L。
儀器和裝置
分光光度計。
蒸餾裝置全玻璃，包括500mL玻璃蒸餾器和蛇形冷凝管。如圖78.3所示。
錐形分液漏斗(250mL)。
微量蒸餾燒瓶(100mL)。
空氣冷凝管(可用玻璃管自行彎制)。
水銀溫度計(250℃)。
棕色容量瓶(100mL)。
試劑瓶(125mL)，棕色。
試劑
無酚水普通蒸餾水置于全玻璃蒸餾器中，加NaOH至強堿性，滴入KMnO4溶液至深紫紅色，放入少許無釉瓷片(浮石或玻璃毛細管亦可)，加熱蒸餾。棄去初餾分，收集無酚水于硬質玻璃瓶中，或于每升蒸餾水中加入0.2g經280℃活化4h的活性炭粉末，充分振搖后用0.45μm濾膜過濾。
磷酸。
鹽酸。
三氯甲烷或二氯甲烷。
硫酸銅溶液(100g/L)稱取10g硫酸銅(CuSO4·5H2O)溶于水中并稀釋至100mL。
淀粉溶液(10g/L)稱取1.0g可溶性淀粉，盛于200mL燒杯中，加少量水調成糊狀，加入100mL沸水攪拌，冷后加入0.4gZnCl2或0.1g水楊酸防腐。
緩沖溶液(pH=9.8)稱取20g氯化銨(NH4Cl)溶于100mL濃氨水中，此溶液pH為9.8。
4-氨基安替比林溶液(20g/L)稱取2g4-氨基安替比林溶于水中，并稀釋至100mL，貯存于棕色瓶中，置于冰箱內，有效期一周。
鐵氰化鉀溶液(80g/L)稱取8g鐵氰化鉀［K3Fe(CN)6］溶于水中，并稀釋至100mL。貯存于棕色瓶中，置于冰箱內，可穩定一周。顏色變深時，應重新配制。
溴酸鹽-溴化物溶液c(1/6KBrO3)=0.100mol/L稱取2.784g無水溴酸鉀(KBrO3)溶于水中，加10g溴化鉀(KBr)溶解后稀釋至1000mL。
硫代硫酸鈉標準溶液c(Na2S2O3)=0.0250mol/L。
精制苯酚將苯酚置于50～70℃熱水浴中溶化，小心地移入100mL蒸餾瓶中，用包有鋁箔的軟木塞塞緊，其中插有一支250℃水銀溫度計，蒸餾瓶的支管與空氣冷凝管連接，用一干燥的錐形燒瓶接受器。蒸餾裝置示意圖78.3所示。電爐加熱蒸餾，棄去帶色的初餾出液，收集182～184℃餾分(無色)密封避光保存。
酚標準儲備溶液ρ(C6H5OH)≈1.00mg/mL稱取1.000g精制苯酚溶于水中，并稀釋至1000mL。
圖78.3 苯酚蒸餾裝置示意圖
通常直接稱取精制苯酚即可配標準溶液，若為非精制苯酚可按下法標定:
移取10.00mL待標定的酚標準儲備溶液，注入250mL碘容量瓶中，加入50mL水、10.00mL0.100mol/LKBrO3-KBr溶液及5mLHCl，立即蓋緊瓶塞，搖勻。避光放置5min后用0.0250mol/LNa2S2O3標準滴定液滴定，至呈淡黃色時，加入1mL10g/L淀粉溶液，繼續滴定至藍色剛好消失為止，記下Na2S2O3標準溶液滴定體積V2。同時用水做試劑空白滴定，消耗Na2S2O3標準溶液體積為V1。
按下式計算酚標準儲備溶液的濃度:
巖石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
式中:ρf標為酚標準儲備溶液的質量濃度，μg/mL;V1為試劑空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，mL;V2為酚儲備溶液消耗標準硫代硫酸鈉溶液的體積，mL。
酚標準中間溶液ρ(C6H5OH)=10.0μg/mL移取10.0mL(或相當于10.0mg酚的體積)酚標準儲備溶液(1.00mg/mL)，用水稀釋至1000mL，搖勻。當天配制。
酚標準溶液ρ(C6H5OH)=1.00μg/mL移取10.0mL酚標準中間溶液(10.0μg/mL)，用水稀釋至100mL，搖勻。臨用時配制。
甲基橙指示液(2g/L)。
水樣保存及處理
酚類化合物易被氧化，應在采集后4h內進行分析。否則，按下述措施予以保護:①水樣收集在玻璃瓶中。②用磷酸將水樣品酸化到pH4.0，以防止酚類化合物分解。③向每升水樣中加入2.0g硫酸銅(CuSO4·5H2O)抑制生物對酚的氧化作用。④在4℃的條件下冷藏水樣，并在采樣后24h之內分析樣品。
校準曲線
分別移取0mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、7.00mL、10.00mL、15.00mL酚標準溶液(1.00μg/mL)，于一系列預先盛有100mL水的250mL分液漏斗中，最后加水至200mL。系列各點含酚濃度分別為0μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、35.0μg/L、50.0μg/L、75.0μg/L。
向各分液漏斗內加入1.00mLpH=9.8的緩沖溶液混勻。再各加1.0mL20g/L4-氨基安替比林溶液，混勻，加1.0mL80g/L鐵氰化鉀溶液，混勻，放置10min。加10.0mL三氯甲烷，振搖2min，靜置分層，接取三氯甲烷提取液于比色皿中，在波長460nm處，用三氯甲烷作參比，測量吸光度(Ai)。
以吸光度Ai-A0(標準空白)為縱坐標，酚濃度為橫坐標，繪制校準曲線。
分析步驟
水樣前處理。量取200mL水樣(若酚量高可少取水樣)，記下體積V，加無酚水至200mL，置于500mL全玻璃蒸餾器中，用(1+9)H3PO4調節pH至4.0左右(以2g/L甲基橙作指示劑，使水樣由橘色變為橙紅色)。加入5mL100g/LCuSO4溶液，放入少許無釉瓷片(浮石或玻璃毛細管)，加熱。蒸出150mL左右時，停止蒸餾，在沸騰停止后，向蒸餾瓶內加入50mL左右水，繼續蒸餾，直到收集餾出液(D)大于或等于200mL為止。若樣品已加入H3PO4和CuSO4酸化保存，則可直接蒸餾(若水樣經稀釋則須補加H3PO4和CuSO4)。
試樣的測定。將餾出液(D)，全量轉入250mL分液漏斗中，按校準曲線工作步驟加入1.00mLpH=9.8的緩沖溶液等，測量吸光度Aw。
同時量取200mL無酚水，按上述步驟操作，測定分析空白吸光度Ab。
由(Aw-Ab)查校準曲線或用線性回歸方程計算水樣中揮發酚的濃度。
若是經稀釋后再蒸餾的水樣，則按下式計算其含酚質量濃度:
巖石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術
式中:ρf樣為水樣中酚質量濃度，μg/L;ρfD為查標準曲線得酚質量濃度，μg/L;V1為餾出液(D)體積，mL;V為量取水樣體積，mL。
注意事項
1)將水樣蒸餾，餾出液清亮，無色，從而消除渾濁和顏色的干擾。鐵(Ⅲ)能與鐵氰酸根生成棕色產物而干擾測定，蒸餾將排除這一干擾。
2)為了防止芳香胺(苯胺、甲苯胺、乙酰苯胺)的干擾，以pH9.8～10.2最合適，因為此范圍內20mg/L苯胺所產生的顏色僅相當于0.1mg/L酚的顏色。
3)游離氯能氧化4-氨基安替比林，還能與酚起取代反應生成氯酚。
4)NH4OH-NH4Cl體系的緩沖液比較穩定，由于增大了溶液NH3的濃度，可以抑制4-氨基安替比林被氧化為安替比林紅的反應。
5)主試劑在空氣中易變質而使底色加深，此外4-氨基安替比林的純度越高，靈敏度越高。如配制的4-氨基安替比林溶液顏色較深時，可用活性炭處理脫色。
6)過硫酸銨［(NH4)2S2O8］可代替鐵氰化鉀［K3Fe(CN)6］。
7)測定酚的水樣必須用全玻璃蒸餾器蒸餾，如用橡皮塞、膠皮管等聯接蒸餾燒瓶及冷凝管，都能使結果偏高和出現假陽性而產生誤差。
8)各種試劑加入的順序很重要，不能隨意更改。
9)停止蒸餾時，須防電爐余熱引起的爆沸，以免將瓶塞沖起砸碎或沾污冷凝管。
10)比色槽在連續使用過程中，宜用氯仿蕩洗，蒸發至干。
11)水樣干擾物質的消除。來自水體的干擾可能有分解酚的細菌、氧化及還原物質和樣品的強堿性條件。在分析前除去干擾化合物的處理步驟中可能有一部分揮發酚類被除去或損失。因此，對一些高污染海水，為消除干擾和定量回收揮發酚類，需要較嚴格的操作技術。
a.氧化劑。水樣中的氧化劑能將酚類氧化而使結果偏低。采樣后取一滴酸化了的水樣于淀粉-碘化鉀試紙上，若試紙變藍則說明水中有氧化劑。采樣后應立即加入硫酸亞鐵溶液或抗壞血酸溶液以除去所有的氧化性物質。過剩的硫酸亞鐵或抗壞血酸在蒸餾步驟中被除去。
b.油類和焦油。如水樣中含有石油制品等低沸點污染物，可使蒸餾液渾濁，某些酚類化合物還可能溶于這些物質中。采樣后用分液漏斗分離出浮油，在沒有CuSO4存在的條件下，先用粒狀NaOH將pH調節至12～12.5，使酚成為酚鈉，以避免萃取酚類化合物。盡快用四氯化碳(CCl4)從水相中提出雜質(每升廢水用40mL四氯化碳萃取兩次)，并將pH調到4.0。用三氯甲烷萃取時，須用無酚水作一試劑空白，或先用1g/LNaOH溶液洗滌三氯甲烷，以除去可能存在的酚。二氯甲烷可代替三氯甲烷，尤其在用NaOH提純三氯甲烷溶液形成乳濁液時。
c.硫的化合物。酸化時釋放出H2S能干擾酚的測定，用H3PO4將水樣酸化至pH4.0，短時間攪拌曝氣即可除去H2S及SO2的干擾。然后加入足夠的CuSO4溶液(100g/L)，使樣品呈淡藍色或不再有CuS沉淀產生。然后將pH調到4.0。銅(Ⅱ)離子抑制了生物降解，酸化保證了銅(Ⅱ)離子的存在并消除樣品為強堿性時的化學變化。