一:生長期
重要性無庸置疑,比如外源DNA基因組整合時,酵母通常選取OD600值為1-2左右.這是因為其時酵母分裂旺盛,細胞核膜較易被攻入(處于有絲分裂的前幾期);同理,基因組DNA松散暴露,電轉入的外源DNA較易整合; 細胞生命力也較強. 多種因素組合,使得轉化率得以提高.
二:將你的細胞洗干凈些
很多新手做細菌酵母電轉效率不高的原因有時很簡單.最后的細胞懸液中帶有太多的離子,導致電流太強.曾看見新手電轉時,電轉杯中見火光;那已經不是實驗成敗,而是實驗安全問題了
.建議不需要嚴格按書上所寫步驟操作.如果自己不放心,可以多洗幾遍.比如電轉酵母需用水洗兩遍,山梨醇洗兩遍,我經常水洗三遍以徹底去除離子,效果很不錯的.