1.
細胞生長狀態和密度:
不要用經過多次轉接或儲于4℃的培養菌，最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉接用于制備感受態細胞的菌液。細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監測培養液的OD600
來控制。DH5α菌株的OD600
為0.5時,細胞密度在5×107
個/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時比較合適。密度過高或不足均會影響轉化效率。
2.
質粒的質量和濃度:
用于轉化的質粒DNA應主要是超螺旋態DNA(cccDNA)。轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比,但當加入的外源DNA的量過多或體積過大時,轉化效率就會降低。1ng的cccDNA即可使50μl
的感受態細胞達到飽和。一般情況下,DNA溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%。
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。