斑點金免疫滲濾測定（DIGFA）實驗

斑點金免疫滲濾測定實驗是在斑點免疫滲濾測定法基礎上，改用膠體金標記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應。全過程可于數分鐘內完成，陽性結果在膜上呈紅色斑點。

細胞樣品

 PBS吐溫-20BSA特異性抗體 抗原金標抗體

滲濾裝置NC膜

一、試劑及材料
 

1.  滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6 cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個直徑0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性較強的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點加1-2 ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。
 

2.  封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。
 

3.  洗滌液：50 mol/L，pH7.2 PBS。
 

4.  特異性抗體(一抗)或抗原
 

5.  金標抗體
 

二、操作方法
 

1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100 ml）封閉液；
 

2. 待其滲入盒內，在NC膜上，加待檢標本1滴（約50 ml）；
 

3. 待其滲入盒內，在NC膜上，滴加2滴（約100 ml）洗滌液；
 

4. 待其滲入盒內，在NC膜上，加金標抗體1滴（約50 ml），使其與NC膜上吸附的檢品發生反應；
 

5. 待其滲入盒內，在NC膜上，滴加2滴（約100 ml）洗滌液；
 

6. 至洗滌液完全滲入盒內
 

三、結果觀察
 

在小孔NC膜上出現紅色反應時為陽性反應，陰性反應不著色。
 

1.   特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標本和金標抗體的用量事先都必須應用方陣法確定最適用量。
 

2.   盒底充填的墊料吸水性要強，否則影響結果。