EF手性對突變鈣調蛋白與一氧化氮合酶結合域肽段相互作用研究
一氧化氮合酶(NOS)是一種非常重要的生物小分子NO合成催化酶，一氧化氮合（NOS）包括三個同型酶：神經酶（nNOS）, 和內皮型一氧化氮合酶（eNOS）以及誘導型一氧化氮合酶（iNOS）。每種酶產生的NO分別用于神經傳遞、血管舒張和免疫應答.一氧化氮合酶是通過鈣調蛋白結構閾將N末端氧化酶結構域和c-末端結合域形成的同源二聚體蛋白。
一氧化氮合酶（NOS）能催化L-精氨酸生成NO及在幾個關鍵的生理過程中起主要作用，鈣調蛋白（CaM）是小的泛素化Ca+2偶聯蛋白，用于激活（NOS）;鈣調蛋白通過EF手性變化與Ca+2結合，但鈣調蛋白激活NOS的機制還不完全清楚.目前用于CaM與NOS 相互作用研究方法較為復雜、耗時。為此，加拿大waterloo大學的John通過niocya 公司最新開發的LSPR 實時無標記檢測技術分析了不同手性對突變的CaM與NOS相互作用，對比CaM與NOS 的結合親和力，對通過簡單方法獲得的 CaM-NOS作用結果進行了動力學數據不錯，揭示CaM通過EF手性對突變激活NOS！ 并將該成果與研究方法在2017化學生物物理學研討會進行了分享。
CaM是一種小的，高度動態的,催化Ca2+結合的蛋白，幾乎存在所有真核生物體中，對NOS的活性是必須的。它由一個可變的中心連接子區連接的球狀N末端和c-末端結構域構成，每個區域CaM 通過2對手性基序與Ca2+結合，可以結合4個Ca2+，這些基序對于相互結合及NOS的活性是必須 。
圖為：鈣調素的Ca2+不同結合狀態（A）Apo-CaM (B) HOLO-CaM (C) HOLO-CaM結構緊湊
圖為：不同的CaM EF手性突變后結構示意圖。
根據之前實驗獲取的一些信息，John團隊利用Nicoya 的LSPR ZL技術產品OpenSPR實時無標記技
術對CaM與NOS的激活機制做檢測；實驗過程先對經電泳驗證過表達的CaM純化并做了質量鑒定，之后用于與NOS相互作用研究。
圖：CaM純化后SDS-PAGE 分析結果