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  • 發布時間:2020-07-27 17:55 原文鏈接: 顯微鏡的七種觀察方式(二)

    四.微分干涉稱鏡檢術(Differential interference contrast  DIC)

     微分干涉鏡檢術出現于60年代,它不僅能觀察無色透明的物體,而且圖象呈現出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術所不能達到的某些優點,觀察效果更為逼真。
    原理;
     微分干涉稱鏡檢術是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等,光束分別在距離很近的兩點上通過被檢物體,在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小,而不出現重影現象,使圖象呈現出立體的三維感覺。
     
    微分干涉圖片


    DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡,技術設計要復雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光系統的前面,使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二者成一小夾角。聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致,在穿過標本相鄰的區域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個偌瑪斯斯棱鏡,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束。
    這時兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光程差值等于波長一半時,穿過的光達到最大值。于是在灰色的背景上,標本結構呈現出亮暗差。為了使影像的反差達到最佳狀態,可通過調節DIC滑行器的縱行微調來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象,通常是一側亮,而另一側暗,這便造成了標本的人為三維立體感,類似大理石上的浮雕
    微分干涉原理圖



    五.偏光顯微鏡(Polarizing microscope  POL  )
    偏光顯微鏡的特點
       偏光顯微鏡是鑒定物質細微結構光學性質的一種顯微鏡。凡具有雙折射的物質,在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,當然這些物質也可用染色發來進行觀察,但有些則不可能,而必須利用偏光顯微鏡。
       偏光顯微鏡的特點,就是將普通改變為偏光進行鏡檢的方法,以鑒別某一物質是單折射(各向同行)或雙折射性(各向異性)。
       雙折射性是晶體的基本特性。因此,偏光顯微鏡被廣泛地應用在礦物,化學等領域。在生物學和植物學也有應用。

    六.浮雕相襯顯微鏡(RC HMC )
    1975年,Robert Hoffman 博士發明
    2002年,ZL到期,各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術產品
    原理
     斜射光照射到標本產生折射、衍射,光線通過物鏡光密度梯度調節器產生不同陰影,從而使透明標本表面產生明暗差異,增加觀察對比度
    特點
    提高未染色標本的可見性和對比度;
    圖象顯示陰影或近似三維結構而不會產生光暈;
    可檢測雙折射物質(巖石切片、水晶、骨頭) ;
    可檢測玻璃,塑料等培養皿中的細胞,器官和組織;
    聚光鏡的工作距離可以設計的更長;
    RC物鏡也可用于明場,暗場和熒光觀察

    七:熒光顯微鏡(Fluorescence Microscopy  FL)
     熒光鏡檢術是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發后而產生長波長的熒光,然后觀察。
    熒光圖象


    優點:
    ? 檢出能力高(放大作用)
    ? 對細胞的刺激小(可以活體染色)
    ? 能進行多重染色
    用途:
    ? 物體構造的觀察——熒光素
    ? 熒光的有無、色調比較進行物質判別——抗體熒光等
    ? 發熒光量的測定對物質定性、定量分析
    熒光原理圖

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