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  • 發布時間:2021-05-08 18:34 原文鏈接: 顯微鏡基本知識(二)

    一、顯微鏡接物鏡頭上的標志

      1、鏡頭種類和放大倍數

      Splan10xSplan40xSplan100x(平場消色差)

      2、 鏡口率(數值孔徑) N.A表示

      N.A0.25(低) N.A0.65(高) N.A1.25~1.40(油)

      3、鏡筒長度(mm)

      160/—160/0.17,160/0.17(蓋片厚度)

      4、色條標記:白100;藍40;綠20;黃10

    二、顯微鏡的精度

      1、齊焦精度:鏡頭轉換應該在一個平面上;

      2、 定位精度:鏡頭轉換應該在一個視野中;使用不當破壞精度

      3、合軸調節:目鏡、物鏡、聚光器應該在一個光軸上,縮小聚光器光環到最小,旋轉聚光器螺絲,調節到正中。

      3個數據使用不當都影響觀察質量,效果受到影響。所以觀察不清楚,拍照照片效果不佳與精度合軸不當有關。

    三、 鏡口角

      鏡口角:接物鏡鏡頭接觸,從標本射過來的光線,伸展到接物鏡下組透鏡邊緣所張的角。

      以“α”表示。10×N.A :0.25=30°

      40×N.A:O.65=80°

      100N.A:1.25=110 °

    四、鏡口率(數值孔徑)

      鏡口率是指光線從聚光器經過蓋片,所引起折射后所形成光錐底面積的孔徑數值,又稱數值孔徑,通常以N.A 表示,刻在接物鏡和聚光器的外側。

      1.它是判斷接物鏡和聚光器的重要依據,是判斷顯微鏡優良的標準。

      2.顯微鏡質量標準決定鏡口率高低,不決定放大倍率大小。

    五、鏡口率的定義

      鏡口率是鏡口角半數的正弦和媒介質曲折率兩者的乘積。公式:

      N.A== n . Sinα/2

      n :介質折射率(空氣1;水1.33;油1.515)

      α:鏡口角

    六、利用介質提高鏡口率

      設鏡口角 90°

      空氣: 1× Sin1/2 =0.707

      水侵 : 1.33 × 0.77==0.94

      油 侵:1.515 × 0.707==1.071

      改變介質藉以提高分辨率(兩點之間最大距離),決定觀察物體的精度與效果,研究者力求改變介質,提高精度。

    七、增加鏡口角為110度

      設鏡口角 110°

      空氣: 1× Sin1/2=0.707

      空氣:N.A==1×0.8251 ≈0.83微米(物體大小)

      水浸:N.A== 1.333×0.8251==1.11微米

      油浸:N.A==1.515 ×0.8251==1.25微米

      要提高分辨率必須: 1.增加鏡口角;2.增大介質折射率。

    八、普通光學顯微鏡分辨率極限 

      α <180. Sinα/2<1

      干燥系物鏡鏡口率<1,在0.04~0.95之間

      油浸物鏡鏡口率提高0.83~1.25

      目前油鏡鏡口率為1.40;顯然可以提高分辨率

    九、顯微鏡的分辨率

      分辨率,鑒別力,分辨本領;

      分辨率:顯微鏡分辨被檢物體的細微結構的能力。它與“分辨距離”成反比,分辨的距離越小,顯微鏡的分辨率越高。

      分辨率(R )公式:R=λ/2 N.A=波長/2鏡口率

    十、光波的波長

      十一、分辨率計算、分辨率計算

      低倍N.A =0.28; 高倍=0.65;油浸=1.25

      波長0.55(黃色全波長)

      R=0.55/2×0.28=0.55/0.56=1μ(物體大小)

      R=0.55 /2×0.65=0.55/1.3=0.42μ

      R=0.55/2×1.25=0.55/2.5=0.22μ

      如果R=0.55/2×1.40= 0.55/2.8=0.19μ

      鏡口率越大,分辨率越高,物鏡的價值越優。

    十二、如何提高顯微鏡分辨率1

      1、提高鏡口率;

      波長0.55;N.A1.4,則R=0.55/2×1.4=0.2微米

      普通顯微鏡的分辨率極限 0.2微米

      2.縮短波長紫外線光,則R=0.27/2×1.4=0.1微米

      可提高分辨率一倍(熒光顯微鏡)

      采用更短X,γ射線,電鏡電子流波長0.0387A

    十三、如何提高顯微鏡分辨率2

      3、改變顯微鏡的射入方式,以直射改為斜射,暗地映光顯微鏡,提高分辨率一倍,觀察活體。

      4、改短波的結構,波峰升高;降低波谷,使用1/2波峰或波谷,從而提高分辨率,如相差顯微鏡。1952年獲、諾貝爾獎。分辨率0.1微米(活體,正負相差)

      5、采用1/4波長提高分辨率,如微分干涉顯微鏡

    十七、暗視野顯微鏡介紹

      普通顯微鏡其照明光線從標本下方經過聚光器匯聚后透過標本,進入物鏡,它適用于觀察對光可透的標本。若利用斜射光照射物體,使直射光線不能直接進人物鏡,只有標本經斜射照明后發出的反射光可進入物鏡,這樣在顯微鏡下可見到暗視野中明亮的物像。利用暗視野顯微鏡可以觀察到標本的細微部分,如細菌鞭毛的運動和梅毒螺旋體、奮森氏螺旋體。

      聚光器的區別:暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區別只在于二者的聚光器不同,暗視野聚光器可阻止光線直接照射標本,使光線斜射在標本上。常用的暗視野聚光器有拋物面聚光器、心形聚光器和同心球面聚光器。

      調焦范圍:載物臺垂直運動由滾柱(齒條—小齒輪)機構導向,采用粗微同軸旋鈕,

      粗調行程每一圈為36.8mm,總行程為25mm,微調行程為每圈0.2mm,。有的顯微鏡具備粗調限位器和張力調整環

      結語:我是以“彎背為橋,站立為梯,橋之為道,梯之望理”告訴我整理資料。

      每人的手機或是計算機,日常使用中能夠發揮最大效能,最多30%就不錯了,能夠使用就心滿意足了,不去深入最佳。而顯微鏡就不同了,我們要發揮最大效能,探索微觀世界的奧秘,要在復雜的條件下,區別細微結構,就不能不要求把儀器調整到最佳效能,取得最好效果,即使非常好的顯微鏡調節精度不夠,拍照的結果卻不盡人意,其原因是基礎知識與技術水平的提高。


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