1.干擾物質
此法是在Folin-酚法的基礎上引入雙縮脲試劑,因此凡干擾雙縮脲反應的基團,如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2以及在性質上是氨基酸或肽的緩沖劑,如Tris緩沖劑以及蔗糖,硫酸銨,巰基化合物均可干擾Folin-酚反應。此外,所測的蛋白質樣品中,若含有酚類及檸檬酸,均對此反應有干擾作用。而濃度較低的尿素(約0.5%左右),胍(0.5%左右),硫酸鈉(1%),硝酸鈉(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)對顯色無影響,這些物質在所測樣品中含量較高時,則需做校正曲線。若所測的樣品中含硫酸銨,則需增加碳酸鈉—氫氧化鈉濃度即可顯色測定。若樣品酸度較高,也需提高碳酸鈉—氫氧化鈉濃度1—2倍,這樣即可糾正顯色后色淺的弊病。
2.控制時間
因Lowry反應的顯色隨時間不斷加深,因此各項操作必須精確控制時間。即第1支試管加入2.0ml堿性硫酸銅試劑后,開始計時,1分鐘后,第2支試管加入2.0ml堿性硫酸銅試劑,2分鐘后加第3支試管,以此類推。全部試管加完堿性硫酸銅試劑后若已到10分鐘,則第1支試管可立即加入0.20ml Folin-酚試劑,1分鐘后第2支試管加入0.20ml Folin-酚試劑,2分鐘后加第3支試管,以此類推。40℃水浴10min,冷卻后,每一分鐘測定一管吸光值。