患者,女,出生時全身無體毛?睫毛及頭發,雙手及雙腳皮膚過度角化,指甲發育不良,無汗毛孔,正常排汗?有汗型外胚層發育不良(hidroticectodermaldysplasia,HED)家族史,基因型為GJB6(NM_006783.4,c.263C>T雜合突變,p.A88V)?2014年結婚,婚后同居生活,性生活正常,2016年孕5月行產前診斷,因胎兒為受累胎兒而引產?2017年來院要求行胚胎植入前遺傳學檢測(PGT)?
抽取患者夫婦及患者父母外周血,提取DNA,高通量測序?以GJB6基因(NM_006783.4chr13:20796101-20806534反向轉錄)編碼區及外顯子-內含子交界為目標區域,并在基因上下游選擇若干單核苷酸多態性(SNP)位點作為遺傳標記,檢測SNP位點基因型,選擇其中相應位點構建單體型,進行連鎖分析?采用短效長方案進行促排卵,獲得的卵子采用卵胞漿內單精子注射(ICSI)方式人工授精,胚胎培養,發育到囊胚時活檢4~10個滋養層細胞,活檢后的胚胎采用玻璃化冷凍法進行冷凍保存?對活檢的滋養層細胞采用多重置換擴增方法(MDA)進行全基因組擴增?采用高通量測序技術,對染色體非整倍體?微缺失?微重復進行檢測,分辨率為4Mb?以GJB6基因編碼區為目標區域,并在基因上下游選擇若干SNP位點作為遺傳標記,檢測SNP基因型,選擇其中相應位點構建單體型?采用一代測序技術對致病變異位點進行驗證?選擇正常胚胎行復蘇移植?妊娠16~18周抽取羊水進行一代測序驗證?通過SNP連鎖成功構建了單體型?患者促排獲得了3個卵子,ICSI后均正常受精,2個胚胎發育到囊胚,進行活檢?1枚胚胎非整倍體檢測結果異常,1枚胚胎非整倍體檢測結果正常?對非整倍體結果正常的胚胎進行單體型分析,結果正常?進行一代驗證,結果正常,證明胚胎未攜帶致病變異(具體檢測結果見表1)?
表1胚胎檢測結果
胚胎移植后第14天血HCG值為359U/L,4周見胎心?胎芽,獲得臨床妊娠?妊娠16周抽取羊水,產前診斷結果顯示胎兒未攜帶致病變異?妊娠40+2周,剖宮產獲得一名女嬰,體重3200g,體檢未見明顯異常?
討論
人體皮膚由胚胎的兩個胚層發育而來,其中外胚層發育成表皮及附屬器官?外胚層發育不良可導致外胚層來源的組織結構或功能異常?HED(OMIM129500)為一種常染色體顯性遺傳病[1],臨床表現主要為毛發缺陷?甲營養不良和掌跖角化三聯征,這些癥狀會對患者的身體和心理造成嚴重的不良影響[2-4]?該病的致病基因為GJB6(gapjunctionbeta6),編碼縫隙連接蛋白Cx30?Cx30為一種縫隙連接通道蛋白,其變異可引起多種皮膚和其他器官的疾病[5-6]?目前發現的GJB6致病變異有4種,包括G11R?V37E?D50N和A88V,這4種變異都會造成氨基酸替換[7]?本病例中的患者經檢測即為p.A88V變異?研究表明,p.A88V的改變可以使角質形成細胞內的ATP滲出到細胞外的基質中,ATP水平增高作為一個旁分泌信號可促進角質形成細胞的增生和分化,從而引起HED的相應臨床表現[8]?
常染色體顯性遺傳病行產前診斷有一半的患者要行流產或引產,會對孕婦及家庭帶來極大的傷害?近年來隨著輔助生殖技術的發展,PGT技術逐漸應用?PGT使用分子遺傳學技術,在體外培養的胚胎階段即可獲得胚胎的遺傳特性,然后挑選不攜帶已知致病變異的胚胎移植?本病例采用PGT技術成功阻斷了1例HED患者的垂直傳遞,幫助患者家庭生育了一名健康的孩子,對家庭和社會都具有非常大的意義?
參考文獻略?