雜交信號的放大實驗——生物素酰化信號

雜交信號

生物素SSC熒光素親和素

離心機培養箱

1.  用生物素酰化探針與切片進行雜交、洗滌，進行第一輪雜交信號檢測。

2.  如切片已承加蓋玻片并密封。可用一針頭或解剖刀片劃開密封的指甲油，移去蓋玻片， 并除去載玻片上指甲油。將玻片浸于0.1%Triton X-100/4×SSC 15 min，并輕搖。盛液的Coplin 廣口瓶外裹以鋁箔以避光，如蓋玻片不易松動，應小心去除，重復洗滌2次。

3.  吸去載玻片上殘余溶液，在載玻片上加50 μl 的1~3 μg/ml 生物素酰化抗親和素抗體，蓋以22 mm² 大小的Parafilm 膜，置加濕盒中，濕盒外裹以鋁箔，放37℃溫育30 min。

4.  取掉Parafilm 膜，在0.1%Triton X-100/4×SSC中輕搖洗滌15 min。

5.  吸去玻片上殘液，加50 μl 生物素信號放大溶液，蓋以Parafilm 膜。放在裹以鋁箔的加濕盒中，于37℃溫育30 min。

6.  移去Parafilm 膜，并以0.1%Triton X-100/4×SSC洗滌15 min。然后以4×SSC洗滌15 min，洗滌時應輕輕搖動。

7.  復染，加蓋玻片，并于顯微鏡下現察（見“熒光原位雜交實驗”基本方案，步驟9~12）。