1、樣品處理：取25g固體（或25mL液體）檢樣加入225mL滅菌生理鹽水，制成混懸液。
2、吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線于血平板（如檢樣污染嚴重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯），36℃培養24h，接種血平板，36℃培養24h,挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，觀察在液體和固體中的培養特征、溶血情況及革蘭氏染色、形態，并進行鏈激酶試驗和桿菌肽敏感試驗。
3、桿菌肽敏感試驗：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單位的桿菌肽紙片置于上述平板上，36℃培養18-24h，如有抑菌圈出現（>10mm對桿菌肽敏感）即為陽性。用已知的陽性菌株（ATCC32210）做對照。