一、實驗主要儀器設備和材料 儀器:血球計數板、顯微鏡、紫外線燈(15W)、電磁攪拌器、離心機。 菌種:枯草芽孢桿菌。 二、實驗方法、操作步驟 1. 菌懸液的制備 (1)取培養48小時的枯草芽孢桿菌的斜面4-5支,用無菌生理鹽水將菌苔洗下,并裝入盛有玻璃珠的小三角燒瓶中,振蕩30分鐘,以打碎菌塊; (2)將上述菌液離心(3 000 r/min,離心15分鐘),棄去上清液,將菌體用無菌生理鹽水洗滌2-3次,最后制成菌懸液; (3)用顯微鏡直接計數法計數,調整細胞濃度為每毫升108個。 2. 平板制作
將淀粉瓊脂培養基溶化后,冷至55 ℃左右時倒平板,凝固后待用。 3. 紫外線處理 (1)將紫外線燈開關打開預熱約20分鐘。 (2)取直徑6 cm無菌平皿2套,分別加入上述菌懸液5 ml,并將無菌攪拌棒放入于平皿中。 (3)將盛有菌懸液的2套平皿置于磁力攪拌器上,在距離為30 cm,功率為15 W的紫外線燈下分別攪拌照射1分鐘及3分鐘。 在紅光下,將上述經誘變處理的菌懸液以10倍稀釋法稀釋成10-1-10-6(具體可按估計的存活率進行稀釋)。 4. 涂平板
取10-4、10-5、10-6三個稀釋度涂平板,每個稀釋度涂平板3只,每只平板加稀釋菌液0.1 ml,用無菌玻璃刮棒涂勻。以同樣操作,取未經紫外線處理的菌稀釋液涂平板作對照。 5. 培養 將上述涂勻的平板,用黑布(或黑紙)包好,置37 ℃培養48小時。注意每個平皿背面要標明處理時間和稀釋度。 6. 計數
將培養48小時后的平板取出進行細菌計數,根據對照平板上菌落數,計算出每毫升菌液中的活菌數。同樣計算出紫外線處理1分鐘、3分鐘后的存活細胞數及其致死率。

7. 觀察誘變效應 將細胞計數后的平板,分別向菌落數在5-6個左右的平板內加碘液數滴,在菌落周圍將出現透明圈。分別測量透明圈直徑與菌落直徑并計算其比值(HC值),并與對照平板進行比較,根據結果,說明誘變效應。并選取HC比值大的菌落移接到試管斜面上培養。此斜面可作復篩使用。 三、實驗結果 1. 將實驗結果填入下表

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