枯草芽孢桿菌的紫外線誘變選育實驗

一、實驗主要儀器設備和材料
 

儀器：血球計數板、顯微鏡、紫外線燈（15W）、電磁攪拌器、離心機。
 

菌種：枯草芽孢桿菌。
 

二、實驗方法、操作步驟
 

1. 菌懸液的制備
 

（1）取培養48小時的枯草芽孢桿菌的斜面4-5支，用無菌生理鹽水將菌苔洗下，并裝入盛有玻璃珠的小三角燒瓶中，振蕩30分鐘，以打碎菌塊；
 

（2）將上述菌液離心（3 000 r/min，離心15分鐘），棄去上清液，將菌體用無菌生理鹽水洗滌2-3次，最后制成菌懸液；
 

（3）用顯微鏡直接計數法計數，調整細胞濃度為每毫升10⁸個。
 

2.  平板制作

將淀粉瓊脂培養基溶化后，冷至55 ℃左右時倒平板，凝固后待用。
 

3.  紫外線處理
 

（1）將紫外線燈開關打開預熱約20分鐘。
 

（2）取直徑6 cm無菌平皿2套，分別加入上述菌懸液5 ml，并將無菌攪拌棒放入于平皿中。
 

（3）將盛有菌懸液的2套平皿置于磁力攪拌器上，在距離為30 cm，功率為15 W的紫外線燈下分別攪拌照射1分鐘及3分鐘。
 

在紅光下，將上述經誘變處理的菌懸液以10倍稀釋法稀釋成10^-1-10^-6（具體可按估計的存活率進行稀釋）。
 

4.  涂平板

取10^-4、10^-5、10^-6三個稀釋度涂平板，每個稀釋度涂平板3只，每只平板加稀釋菌液0.1 ml，用無菌玻璃刮棒涂勻。以同樣操作，取未經紫外線處理的菌稀釋液涂平板作對照。
 

5.  培養
 

將上述涂勻的平板，用黑布（或黑紙）包好，置37 ℃培養48小時。注意每個平皿背面要標明處理時間和稀釋度。
 

6.  計數

將培養48小時后的平板取出進行細菌計數，根據對照平板上菌落數，計算出每毫升菌液中的活菌數。同樣計算出紫外線處理1分鐘、3分鐘后的存活細胞數及其致死率。

7.  觀察誘變效應
 

將細胞計數后的平板，分別向菌落數在5-6個左右的平板內加碘液數滴，在菌落周圍將出現透明圈。分別測量透明圈直徑與菌落直徑并計算其比值（HC值），并與對照平板進行比較，根據結果，說明誘變效應。并選取HC比值大的菌落移接到試管斜面上培養。此斜面可作復篩使用。
 

三、實驗結果
 

1.  將實驗結果填入下表