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  • 發布時間:2020-08-10 21:24 原文鏈接: 染色體CBG標本制備實驗

    實驗方法原理


    異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C顯帶技術呈現,故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區有很強抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可見效果良好的C帶。


    抽取DNA的過程由三個連續操作形成。首先,酸處理可使DNA脫嘌呤,但未使DNA骨架斷裂;其次熱堿處理可使DNA變性,促進繼發的DNA溶解;最后,熱鹽溶液使DNA骨架斷開并使碎片溶解進入溶液中。因此,最終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布。在優良的C帶標本中,常染色質只呈現中期染色體的一般外貌,結構異染色質區著色很深。C帶在檢查1、9、16特別是Y染色體的異質區時尤為重要。


    實驗材料 染色體標本


    試劑、試劑盒 HClBa(OH)2SSCGiemsa染色液


    儀器、耗材 恒溫水浴箱染色缸顯微鏡


    實驗步驟


    一、用品和試劑


    0.2N HCl,5% Ba(OH)2,2×SSC,Giemsa染色液。恒溫水浴箱,染色缸。其余同外周血染色體制備。

     

    二、操作步驟


    基本方案

     

    1.   酸處理:常規制作的染色體標本(未染色)置0.2 N HCl(室溫)處理15-30分鐘。水洗。

     

    2.   堿處理:浸入已預溫至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分鐘。水洗。

     

    3.   熱鹽處理:置2×SSC溶液(67℃)處理60-90分鐘。水洗。

     

    4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10-5分鐘。水洗。氣干。

     

    5.   鏡檢。


    替代方案:

     

    1.   酸處理:常規制作的染色體標本(未染色)置0.2 N HCl(室溫)處理60分鐘。水洗。

     

    2.   堿處理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15-20秒。水洗。

     

    3.   熱鹽處理:置2×SSC溶液(60℃)90分鐘。水洗三次。

     

    4.   染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘。水洗。氣干。

     

    5.   鏡檢。

     


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