柱色譜概述

（一）原理及基本裝置

液相色譜中的柱色譜法又稱柱層析法，既可以用比較復雜的裝置，也可以用簡單的設備。用一根適宜的柱子，一個洗脫裝置，一個流量控制裝置（蠕動泵），一個紫外檢測儀和一個部分收集器就可以構成最基本的分離裝置。色譜柱是整個過程的心臟，在使用時必須滿足下述要求:

(1)柱底應有一凝膠的支持層，該支持層應保證溶液能從柱中自由流出。

(2)支持層下面的死體積要盡可能小。

(3)柱子的出口應有一個合適的接頭與檢測器和部分收集器相連。

(4)以玻璃管和塑料管較好。柱子的基本結構如圖 6–1

早期，通過柱子的液體以重力輸入為主，這時柱子入口高于出口，以產生靜的水壓差。但在洗脫期間，貯液容器中洗脫液液面的下降會降低流體壓力，從而也降低了洗脫液通過柱子的流速。目前多使用蠕動泵來輸送洗脫液（如圖 6–1）。蠕動泵可以產生一個穩定的液體流速而被廣泛地使用，它可以用于上樣品，輸送緩沖液，產生梯度洗脫方式。分離生物大分子時，液體流出后要盡快地進行檢測，一般使用紫外檢測儀。生物大分子一般在28Onm進行連續的檢測(Trp+Tyr)或者在更靈敏的220或205nm(肽帶)波長進行檢測，最后使用收集器收集所需的組分。