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  • 發布時間:2021-03-08 14:05 原文鏈接: 樹脂切片制作過程

    一、實驗儀器及試劑

    1.器具電子天平、70℃恒溫箱、玻璃制刀機、半/超薄切片機、顯微鏡、包埋模、制刀用的玻璃條、鑷子、刀片。

     

    2.試劑

     (1)固定劑:FAA

     (2)脫水劑:20%、40%、60%、80%、90%、95%、100%的乙醇;丙酮

    (3)樹脂:Spurr樹脂

    (4)染色劑:1%堿性品紅

    二、實驗步驟

    1.取材和固定:取樣時所用的器具必須干凈,刀、剪等必須鋒利,在操作時盡量避免拉、鋸、壓等動作對組織細胞造成的機械損傷。一般樣品塊的大約為1立方毫米,取材完成后立即放入固定液中,真空泵抽氣兩到三次,每次1-2min(注意不要讓固定液沸出,如抽完后液體較少,可再補加固定液)。

    2.脫水:用50%、60%、70%、85%、95%、100%的乙醇分別浸漬固定的材料,每種濃度處理10~15min

    3.置換

    (1)在管瓶中加入2ml無水乙醇和1ml丙酮,處理材料10min

    (2)向管瓶中追加1ml丙酮,處理材料10min

    (3)向管瓶中再追加2ml丙酮,處理材料10min

    (4)傾倒出管瓶中的無水乙醇和丙酮混合液,加入純丙酮3次,每次10min。

    4.浸透

    (1)在管瓶中加入1ml丙酮,向內滴入1滴Spurr樹脂,1~2h

    (2)向管瓶中追加1至數滴Spurr樹脂,使Spurr樹脂的濃度逐漸提高,每滴加一次Spurr樹脂,放置1~2h,共滴加0.3ml左右的樹脂,使樹脂濃度達到25%左右。

    (3)用吸管吸去管瓶中0.5~0.8ml的丙酮和Spurr樹脂的混合液,然后加入純Spurr樹脂0.5ml,使樹脂濃度達到50%~60%左右,2~3h

    (4)用吸管吸去管瓶中的丙酮和Spurr樹脂的混合液,加入0.5~0.8ml的Spurr樹脂,2~3h

    (5)更換新配制的Spurr樹脂1ml,過

    (6)重復換樹脂3次,每次12h

    5.包埋與聚合

    (1)先將恒溫箱調至溫度至70℃,包埋模事前烘干置干燥器中存放。

    (2)在濕度小的房間里進行包埋操作。在包埋模的中放上已浸透的材料(用牙簽不損傷樣品地桃),用滴管吸取新配制的Spurr樹脂,并注滿每個穴孔,用牙簽撥樣品,使樣品按一定方位(有利修塊、切片和觀察)排列。做好記載(各穴孔中放的是什么樣品

    (3) 聚合:將包埋樣品的包埋模放入70℃恒溫箱中聚合,8h后取出置干燥器中存放。多余的樹脂可放在膠囊中或放在包埋模的穴孔中同樣品一同聚合。

    6.修塊

    用銼刀或鐵砂皮磨樣品塊,使樣品稍稍暴露,使待切部位呈方形或長方形,zui后用刀片將樣品塊的磨面切平

    7.玻璃刀的制作

    用玻璃制刀機先將玻璃條制成邊長為25mm的正方塊,然后再將每正方塊制作成2把璃制刀。

    8.切片、貼片

    (1)固定樣品塊和玻璃刀

    將樣品塊和玻璃刀固定在半薄切片機上,玻璃刀的避樣品角約為5度,切片機裝樣品部位平放時,玻璃刀刀口與樣品塊處于同一高度。調節玻璃刀前后位置,使刀口接近樣品塊。

     (2)荒切

    開動切片機,調節進刀距離和速度,讓玻璃刀荒切樣品塊,使樣品塊的切面逐漸平整光滑起來。

    (3)切片

    當樣品塊的切面平整光滑后便可正式切片。作為光鏡觀察用的半薄切片厚度一般控制在1-2μm左右。

    (4)貼片

    當切到理想切片時,用尖頭鑷子夾住切片,并把切片釋放到滴有水滴的載玻片的水滴上,然后將載玻片放到烤片機上45℃烤片,當載玻片上的水滴被烤干時切片就被貼在載玻片上。

    (5) 染將堿性品紅染液均勻覆蓋在載玻片上,45℃烤干,隨后用50%乙醇沖洗,并再次把切片烘干。

    (6)封片,觀察

    注意:透射電鏡樣品固定液為2.5%戊二醛溶液




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